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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急求助：关于 基因敲除后的菌株培养
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livacin

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】急求助：关于 基因敲除后的菌株培养

我做的赖氨酸dapA基因的敲除，现在已经做完敲除部分 但出现一个不知道原因的问题 就是我的菌经过含有卡那霉素的SOB培养液过夜培养 生长情况不是很好 但也有浑浊出现 但是就是不能提基因组DNA 添加TE之后悬浮 再加蛋白酶K 未经改造的菌株 变清亮黏液 而我改造的菌却没有任何变化 如果说菌已死 但是经过转接之后还是可以生长但生长状况不好
还有一个问题 如果我敲除成功 出现赖氨酸缺陷 培养液里的营养物质可不可能出现菌液营养不足导致生长受限
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1楼 2009-12-30 09:49:59
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0):同意 12-30 12:16
敲除赖氨酸代谢相关基因,肯定会影响生长.
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2楼2009-12-30 11:41:49
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议验证一下自己是不是敲除成功~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2009-12-30 12:44:10
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livacin

铁虫 (正式写手)
提基因组DNA 添加TE之后悬浮 再加蛋白酶K 无变清亮黏液现象 提不出来没有办法检验啊 很是郁闷的
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4楼2009-12-30 18:25:37
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
鉴定基因是否敲除需要提基因组吗？
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5楼2009-12-30 19:02:10
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livacin

铁虫 (正式写手)
不需要吗？还有其他的办法？
我暂时还不知道 难道只要一个补充培养基？不是还要分子手段的判断才好嘛？
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6楼2009-12-30 22:02:00
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不行就用细菌基因组试剂盒提提试试吧
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7楼2009-12-31 12:47:36
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powerfulliu

金虫 (小有名气)

不用抽DNA，直接用菌落PCR做个试试。

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
将培养浑浊的菌液离心后，挑取点作为PCR的模板，扩增后电泳检测。
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8楼2009-12-31 13:40:31
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livacin

铁虫 (正式写手)
先谢谢大家的回复 新年快乐
楼上所提的建议我也试过了 就是2.5ul菌液 99度 3min 之后pcr
效果不是很好
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9楼2010-01-01 10:11:24
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