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chener

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于反义和RNAi 载体构建

我最近要构建反义和RNAi 的载体,想请教大家一下,构建这两种载体有什么特别的要求和要注意哪些问题?比如说用来反义的片段多长合适,是靠近序列3’ 还是5’ 端或都不影响,构建RNAi载体对内含子有没有要求,其它基因或其他物种里的内含子还行?

[ Last edited by chener on 2009-12-30 at 01:05 ]
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thinka

铜虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-29 19:29
chener(金币+3,VIP+0): 12-30 01:04
200左右就可以了

构建RNAi载体是内含子有没有要求,其它基因或其他物种里的内含子还行?这句话没看懂
2楼2009-12-29 17:13:34
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-29 21:37
chener(金币+3,VIP+0): 12-30 01:04
根据文献看,片段长度大于39 base 就可以了。我们做的是200-300bases,目前已经能够看到抑制的效果。3,或5,端不影响吧,但如果你要特异地抑制某个基因,而该基因是某个基因家族的一员,就要用3,或5, 非翻译区域。
3楼2009-12-29 20:34:16
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
chener(金币+3,VIP+0): 12-30 01:04
200-300bases,但是要先在基因组比对一下,以防将其他基因干扰掉.
4楼2009-12-29 21:20:59
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

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amisking(金币+2,VIP+0): 12-29 21:37
chener(金币+3,VIP+0): 12-30 01:04
什么200bp,300bp那是植物的RNAi的吧,如果是动物细胞的话,最好是21bp,而且有很多公司的网页上有预测这种RNAi的靶位的,这个考虑的因素比较多,一个要符合现有的RNAi的序列规则,还要考虑设计的RNAi没有脱靶的可能
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-12-29 21:23:20
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yet

铜虫 (小有名气)

我正构建RNAi 载体

★ ★ ★
chener(金币+3,VIP+0): 1-5 19:33
想交流QQ联系407449992
6楼2010-01-03 21:15:48
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