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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教一个问题
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教一个问题

已经知道了一种病原物的 某段基因序列有很强的免疫原性，想用植物来生产这种病原的疫苗，应该怎样设计实验方案？请各位高手支招。
我的思路是：把序列克隆到载体T-DNA中，然后转入植物基因组，这样是不是就OK了？表达出来的蛋白是不是就会引发 抗体出现》？？另外如果抗体与抗原结合了以后，如何把抗体分离出来？？现在要的是大体思路，先不用考虑具体细节，望各位大侠赐教！！！
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1楼 2009-12-29 10:48:53
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 12-29 15:56
是不是有点麻烦啊，你要转到什么植物中，转基因植物不太好做吧，周期是不是有点长吧。你可不可以先在大肠中表达（加上标签，便于你后续纯化），然后纯化出来蛋白，再注射到植物中。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2009-12-29 14:54:31
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
感谢回帖！是一道题目，呵呵。蛋白注射到动物体内可以得到抗体，因为血液是循环的。转化到植物中是不是不太好弄，第一是能注射到植物中抗体的量有限，第二是蛋白能不能透过细胞壁，会不会产生抗体？
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3楼2009-12-29 19:25:29
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以将你要的基因连到Ti质粒上，然后转到农杆菌中，之后进行侵染植物。就是采用叶片注射等方法侵染。
也可以用病毒做载体试试，把你做的基因连到某种病毒载体上，然后去侵染植物。
最后用分子生物学手段再对其验证，提RNA，RT-PCR验证看基因是否转进去，更进一步就需要提蛋白验证看是否表达或有活性。
注：两个都需要有空白对照。
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4楼2009-12-29 20:22:17
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
多谢三楼 的建议，还有个问题不太明白。抗体和抗原蛋白结合后，怎么把抗体纯化出来？
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5楼2009-12-29 22:04:02
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
更正一下，我是4楼的。
关于蛋白这一块，我确实没有接触过，不过我想你可以提蛋白后，根据你的抗体的特异性，用特异性的柱子挂柱分离出来。
当然只是建议，你思考一下，或者查一下相关文献。
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6楼2009-12-30 10:37:19
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