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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 【求助】影响LH-20反向柱分离极性大化合物的因素
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yymslx2010

金虫 (著名写手)
★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 12-29 23:16
凝胶上样时，样品要过滤的，上样时溶解溶剂应越少越好，否则色带拉太长，影响分离效果。刚上样品后流速不宜过快，我们一般7秒左右，样品下到中间后流速可以调快点。
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11楼2009-12-29 21:09:21
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seapass

至尊木虫 (职业作家)

超哥

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by yymslx2010 at 2009-12-29 21:09:
凝胶上样时，样品要过滤的，上样时溶解溶剂应越少越好，否则色带拉太长，影响分离效果。刚上样品后流速不宜过快，我们一般7秒左右，样品下到中间后流速可以调快点。

这个7s是个什么的流速概念？ 请问你的凝胶柱也是用加压来调流速的吗？
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独上高楼。。。
12楼2009-12-29 21:30:40
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bingfei1016

银虫 (小有名气)
恩恩学习了
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13楼2009-12-29 23:31:34
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yymslx2010

金虫 (著名写手)
★ ★
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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 1-7 00:15
11楼的朋友，7s就是流速为7秒钟滴一滴，一般7s左右就可以了，凝胶我还没听过要加压的，个人认为没有加压的必要，不加压都流的很快了。流速慢点的话分离效果很好的！
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14楼2010-01-05 22:15:03
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seapass

至尊木虫 (职业作家)

超哥

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by yymslx2010 at 2010-1-5 22:15:
11楼的朋友，7s就是流速为7秒钟滴一滴，一般7s左右就可以了，凝胶我还没听过要加压的，个人认为没有加压的必要，不加压都流的很快了。流速慢点的话分离效果很好的！

哦 晓得了！可我在有的帖子看到说流速慢分离的效果不好，好像说什么太慢会有扩散的现象，影响分离效果，不知道是不是我理解没全，不过我做过的预实验，是倾向于慢点分离效果好，凝胶加压的好像不少人都有这么做吧
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独上高楼。。。
15楼2010-01-06 11:57:02
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zinedine

新虫 (正式写手)
★ ★
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 1-7 00:15
LH-20反相柱？你说的是sephadxe LH-20吧，这种凝胶根据洗脱剂的不同会有正相反相分离之分，一般正相用氯仿-甲醇，反相用甲醇或甲醇-水，正相分离靠分子量，反相分离主要靠样品跟凝胶的吸附能力，柱长和内径影响不大，但上样不要超载，我曾经用过一根内径1cm常约40cm的柱子分离鞣质B7，在甲醇-水60%时样品杂质出柱，冲三天后，改用80%，目标化合物出柱，样品共约300mg
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16楼2010-01-06 23:09:22
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seapass

至尊木虫 (职业作家)

超哥

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by zinedine at 2010-1-6 23:09:
LH-20反相柱？你说的是sephadxe LH-20吧，这种凝胶根据洗脱剂的不同会有正相反相分离之分，一般正相用氯仿-甲醇，反相用甲醇或甲醇-水，正相分离靠分子量，反相分离主要靠样品跟凝胶的吸附能力，柱长和内径影响不 ...

谢谢你的总结！像你说的那柱子，不超载一般是什么范围？
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独上高楼。。。
17楼2010-01-07 00:30:24
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匿名

用户注销 (文坛精英)
★
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18楼2010-01-07 07:47:16
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moonyuer

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 1-9 14:02
过LH20柱前样品先要过微孔滤膜过滤
我做的过程中觉得，流速对出峰时间影响大，也很影响分离效果
还有就是样品不要过稀，会拉长色带，也不要太浓，可能堵柱。上样后需要有足够的吸附时间，再开始洗脱
流动相一般用甲醇和水的固定比例就可以了。
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好好努力!
19楼2010-01-07 11:26:59
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yymslx2010

金虫 (著名写手)
★ ★
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 1-9 14:02
个人觉得柱长和内径对凝胶分离影响是比较大的，过滤的话不必一定用微孔滤膜，这样太浪费了，用棉花就可以了吧，经济实惠，流动相的选择要看你样品的极性大小来确定，有氯甲1：1左右的，纯甲醇，甲水70%左右吧，流速对分离效果还是很大的。
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20楼2010-01-08 18:30:31
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