【求助】影响LH-20反向柱分离极性大化合物的因素 - 药学 - 天然药物化学

11楼2009-12-29 21:09:21

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seapass

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Originally posted by yymslx2010 at 2009-12-29 21:09:
凝胶上样时，样品要过滤的，上样时溶解溶剂应越少越好，否则色带拉太长，影响分离效果。刚上样品后流速不宜过快，我们一般7秒左右，样品下到中间后流速可以调快点。

这个7s是个什么的流速概念？

请问你的凝胶柱也是用加压来调流速的吗？

独上高楼。。。

12楼2009-12-29 21:30:40

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bingfei1016

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恩恩学习了

13楼2009-12-29 23:31:34

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yymslx2010

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11楼的朋友，7s就是流速为7秒钟滴一滴，一般7s左右就可以了，凝胶我还没听过要加压的，个人认为没有加压的必要，不加压都流的很快了。流速慢点的话分离效果很好的！

14楼2010-01-05 22:15:03

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seapass

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Originally posted by yymslx2010 at 2010-1-5 22:15:
11楼的朋友，7s就是流速为7秒钟滴一滴，一般7s左右就可以了，凝胶我还没听过要加压的，个人认为没有加压的必要，不加压都流的很快了。流速慢点的话分离效果很好的！

哦晓得了！可我在有的帖子看到说流速慢分离的效果不好，好像说什么太慢会有扩散的现象，影响分离效果，不知道是不是我理解没全，不过我做过的预实验，是倾向于慢点分离效果好，凝胶加压的好像不少人都有这么做吧

独上高楼。。。

15楼2010-01-06 11:57:02

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zinedine

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LH-20反相柱？你说的是sephadxe LH-20吧，这种凝胶根据洗脱剂的不同会有正相反相分离之分，一般正相用氯仿-甲醇，反相用甲醇或甲醇-水，正相分离靠分子量，反相分离主要靠样品跟凝胶的吸附能力，柱长和内径影响不大，但上样不要超载，我曾经用过一根内径1cm常约40cm的柱子分离鞣质B7，在甲醇-水60%时样品杂质出柱，冲三天后，改用80%，目标化合物出柱，样品共约300mg

16楼2010-01-06 23:09:22

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seapass

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Originally posted by zinedine at 2010-1-6 23:09:
LH-20反相柱？你说的是sephadxe LH-20吧，这种凝胶根据洗脱剂的不同会有正相反相分离之分，一般正相用氯仿-甲醇，反相用甲醇或甲醇-水，正相分离靠分子量，反相分离主要靠样品跟凝胶的吸附能力，柱长和内径影响不 ...

谢谢你的总结！像你说的那柱子，不超载一般是什么范围？

独上高楼。。。

17楼2010-01-07 00:30:24

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匿名

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过LH20柱前样品先要过微孔滤膜过滤
我做的过程中觉得，流速对出峰时间影响大，也很影响分离效果
还有就是样品不要过稀，会拉长色带，也不要太浓，可能堵柱。上样后需要有足够的吸附时间，再开始洗脱
流动相一般用甲醇和水的固定比例就可以了。

好好努力!

19楼2010-01-07 11:26:59

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yymslx2010

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个人觉得柱长和内径对凝胶分离影响是比较大的，过滤的话不必一定用微孔滤膜，这样太浪费了，用棉花就可以了吧，经济实惠，流动相的选择要看你样品的极性大小来确定，有氯甲1：1左右的，纯甲醇，甲水70%左右吧，流速对分离效果还是很大的。