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[交流] 微生物培养基手册大全

微生物培养基手册大全

[分享]临床微生物培养基手册大全

1、营养琼脂（普通琼脂）
成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升
   琼脂（视天气，琼脂质量而定）
制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。

2、血琼脂平板（BA）
制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
   2．尿液，脓液
   3．分离细菌标本用。

3、基础培养基（肉膏汤BB）
成份：蛋白胨 10克    牛肉膏 5克
   氯化钠 5克    水    1000毫升
制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
   2 作普通琼脂斜面。

4、血液培养基（大管肉汤培养基）
成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升
   2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g% 1毫升
   3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升]    49．3% 1毫升
   4 枸椽酸钠                      0．3g
制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
   2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。

5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）
成份：蛋白胨 10克       乳糖    10克
      氯化钠 5克       琼脂    25（22）克
      水    1000毫升    2%伊红溶液20毫升
      0．5%美兰溶液 20毫升
制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）

用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
                        1

6、罗文斯坦培养基
成份：磷酸二氢钾    2．4克       硫酸镁 0．24克
   枸椽酸钠    0．6克       天门冬素 3．6克
   纯甘油（丙三醇） 12毫升       水    600毫升
   马铃薯粉    30克          鸡蛋 1000毫升（约3公斤）
   2%孔雀绿水溶液 20毫升
制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。
   2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。
   3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。
   4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。
质控标准： 1 灭菌试验合格。
         2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。
用途：作结核分枝杆菌培养用。

7、结核半固体培养基
成份：磷酸氢二钠    19克          硫酸镁    0．6克
   磷酸二氢钾    2．5克       天门冬素 5克
   1%孔雀绿    1．5克          甘油    20毫升
   吐温80（10%） 5毫升          水    1000毫升
   枸椽酸钠       2．5克          动物血清 100毫升
   琼脂          1．5克（80小时用甲醇去脂）
   1%孔雀绿    0．78毫升    吐温80（10%） 5毫升
   加动物血清    100毫升
制法： 1 除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2
   2 分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。
   3 待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。
   4 去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。
质控标准：1无菌实验合格。
      2琼脂硬度合适而清亮。
      3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。
用途：培养结核杆菌用。

8、亚碲酸钾血琼脂平板
成份：琼脂基础 100毫升    1 0%葡萄糖    2毫升
   1%亚碲酸钾 4．5毫升    绵羊血    10毫升
制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。
   2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板，凝固后存冰箱备用。
质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。
用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。

9、米培养基
成份：白米    20克          水    1000毫升
   琼脂    20克       吐温80 10毫升
制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。
   2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。
   3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。
质控标准：1灭菌。
      2要求清亮。
      3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。
用途：培养白色念珠菌用。

10、蛋白胨水培养基
成份：蛋白胨 1克    氯化钠    0．5克
   水加至 100毫升    PH调至    7．8
制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。
质控标准：1 放置37℃无菌生长。
      2 接种大肠杆菌24小时生长良好。
      3 可作中国兰平板基础液。
      可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

11、血培养基
成份：蛋白胨 10克          牛肉膏    5克
   氯化钠 5克          葡萄糖    3克
   枸椽酸钠 3克          MgSO4。7H2O 20毫升
   0．5%PABA 10毫升    酵母浸液 10毫升 0．2克（2%过滤）
   *酚红0．4% 6毫升    水    1000毫升
      琼脂    0．5克
*：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。
制法：1、除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4
   2、调好PH后再加酚红。
   3、硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）

12、沙氏培养基
成份：蛋白胨    1克                      水    100毫升
   琼脂    1．5克（琼脂粉1克%）    葡萄糖或麦芽糖 4克

制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。
   2 趁热斜好，凝固备用。
质控标准：1无菌试验合格。
      2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。
用途：作分离培养霉菌用。
注意：1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。
   2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

13、肉渣培养基
成份：牛肉渣       牛肉浸液（牛肉膏）
制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。
用途：用于厌氧菌培养。
注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

14、单糖发酵管培养基（半固体）
  成份： PH7．6-7．8蛋白胨水 1000毫升（0．3克/100毫升）
      1.2%酚红液    0．4毫升
      琼脂          0．4 - 0．5克
      10%糖或醇       10毫升
制备：把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。
质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。

15、明胶培养基
成份：肉浸液    1000毫升（牛肉浸膏5克）
   明胶    12克
制法：
  100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。

15-1、碱性蛋白胨水
成份：
  蛋白胨    20克          氯化钠    5克
  硝酸钾    0．1克    结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O） 0．2克
  水    1000毫升
制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压灭菌15分钟后备用。
用途：用于霍乱弧菌培养。

16、葡萄糖蛋白胨水（M。V用）
成份：蛋白胨    5克       葡萄糖    5克
   K2HPO4    5克       水    1000毫升
制法：将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管
标准：灭菌试验合格。接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。
用途：作鉴别肠道杆菌用。

17、枸椽酸盐培养基
成份：磷酸二氢铵 0．1克    硫酸镁    0．02克
   磷酸氢二钾 0．1克    枸椽酸钠 0．23--0．5克（0．36）
   氯化钠    0．5克    琼脂    1．5克
   0．5%溴麝香草酚兰2毫升（调PH6．8再加）
制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6．8，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固
后备用。
标准：1、灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。
   2、接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。
   3、接种产气杆菌，培养基呈深兰色。
用途：作鉴别大肠杆菌用。

18、双糖铁培养基
成份：
  下层：蛋白胨 1克       氯化钠    0．5克
   葡萄糖 0．2克    琼脂    0．3-0．5克
   水    100毫升
将上述物质混匀调PH7．6后加1．2%酚红0．4毫升
  上层：蛋白胨 1克    氯化钠    0．5克
   乳糖    1克    硫代硫酸钠 0．03克
   硫酸亚铁 0．02克    琼脂    1克
   水    100毫升
制法： 1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。
      2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH8．1，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟）。
      3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。
标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。

19、尿素培养基
成份：蛋白胨    0．1克    氯化钠    0．5克
   磷酸二氢钾 0．2克    尿素    0．2克（或10%2毫升）
   葡萄糖    0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）
   H2O    100毫升    酚红（0．2%） 0．4毫升
制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．
      2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升．
      3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．
      4分装小试管待用．
标准：
  1灭菌试验合格．
  2接种变形杆菌24小时呈红色．
用途：鉴定变形杆菌用．

20、胆盐中性红琼脂
成份：蛋白胨琼脂PH7．2-7．4    5000毫升
   胆盐                      2．5克
   乳糖                      5．0克
   对氨基苯甲酸             25毫克
   1%中性红溶液             25毫升
制法：
  将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．
*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

21、丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）
成份：丙二酸钠    0．3克    酵母浸膏    0．1克
   Nacl    0．2克    硫酸铵    0．2克
   K2HPO4    0．06克    KH2PO4    0．04克
   水       100毫升
   PH6．8，高压灭菌备用．
   0．2%溴麝香酚兰乙醇 1．25毫升
制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．
鉴定：克氏杆菌（+）       赫夫尼亚（+）
      沙门氏菌    （—）    痢疾杆菌    （—）

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