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【讨论】为什么PCR的条带有时有有时没？
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我验证特异性引物，用来做验证的菌有时候能扩出来，有时候扩不出来，而且是分离自不同产地同种产品的同一种菌，有的总能扩出来，有的总是扩不出来。 不知道怎么回事，请大家帮忙分析下，谢谢！ 例如，我的图上，1为目的菌，2和3（做特异性验证的菌，不应扩出来）是分离自不同产地同种产品的同一种菌，2总是扩不出来，但3老能扩出来。 4是目的菌，5和6 也是分离自不同产地同种产品的同一种菌，5总能扩出来，6扩不出来。 请各位指点！ 谢谢！ |
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2楼2009-12-29 23:25:18
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xillpei(金币+2,VIP+0):鼓励通过本网交流提高 12-30 14:06
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可能是引物还可以吧，另外提的DNA比较纯吧，一般提完DNA我会跑个琼脂糖看看，如果有蛋白污染我就不用了，重新提。 因为之前发现蛋白污染对条带影响很大，有的时候甚至看不到目的条带，只能看见一片涂布的现象，所以蛋白污染的最好不用了 琼脂糖的浓度我一般根据目的片段大小选择，一般300bp以下的我都用2%的胶，大一点的片段1%~2%都可以。 煮琼脂糖时要煮沸，呈透明液体了才可以，如果煮完后发现胶看起来很粘稠，而且不透明而且有非常多的微小气泡一样的东西，说明胶没熔好，要再加热知道澄清，透明。 我知道的就这些了，希望能对你有帮助 |
3楼2009-12-30 09:28:29
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6楼2009-12-31 11:50:53