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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】为什么PCR的条带有时有有时没?

我验证特异性引物,用来做验证的菌有时候能扩出来,有时候扩不出来,而且是分离自不同产地同种产品的同一种菌,有的总能扩出来,有的总是扩不出来。
不知道怎么回事,请大家帮忙分析下,谢谢!
例如,我的图上,1为目的菌,2和3(做特异性验证的菌,不应扩出来)是分离自不同产地同种产品的同一种菌,2总是扩不出来,但3老能扩出来。
4是目的菌,5和6 也是分离自不同产地同种产品的同一种菌,5总能扩出来,6扩不出来。
请各位指点!
谢谢!
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275046751

金虫 (正式写手)

★ ★
xillpei(金币+2,VIP+0):鼓励通过本网交流 12-30 14:06
为什么一点杂带都没有,你是怎么跑的啊?
2楼2009-12-29 23:25:18
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

★ ★
xillpei(金币+2,VIP+0):鼓励通过本网交流提高 12-30 14:06
引用回帖:
Originally posted by 275046751 at 2009-12-29 23:25:
为什么一点杂带都没有,你是怎么跑的啊?

可能是引物还可以吧,另外提的DNA比较纯吧,一般提完DNA我会跑个琼脂糖看看,如果有蛋白污染我就不用了,重新提。
因为之前发现蛋白污染对条带影响很大,有的时候甚至看不到目的条带,只能看见一片涂布的现象,所以蛋白污染的最好不用了
琼脂糖的浓度我一般根据目的片段大小选择,一般300bp以下的我都用2%的胶,大一点的片段1%~2%都可以。
煮琼脂糖时要煮沸,呈透明液体了才可以,如果煮完后发现胶看起来很粘稠,而且不透明而且有非常多的微小气泡一样的东西,说明胶没熔好,要再加热知道澄清,透明。
我知道的就这些了,希望能对你有帮助
3楼2009-12-30 09:28:29
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275046751

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
真是个好人啊,谢谢你的回答,学习了
4楼2009-12-30 18:49:01
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275046751

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 小虫之老虫 at 2009-12-30 09:28:


可能是引物还可以吧,另外提的DNA比较纯吧,一般提完DNA我会跑个琼脂糖看看,如果有蛋白污染我就不用了,重新提。
因为之前发现蛋白污染对条带影响很大,有的时候甚至看不到目的条带,只能看见一片涂布的现象 ...

谢谢,你是什么专业的啊?
5楼2009-12-30 18:50:11
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 275046751 at 2009-12-30 18:50:

谢谢,你是什么专业的啊?

食品
6楼2009-12-31 11:50:53
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