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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒条带为什么改变了
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wsshforget

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒条带为什么改变了

1.我提取质粒后跑电泳只有两条带，但是放了一段时间后再跑电泳发现这两条带下面分别多了几条带，这是什么原因？
2.同样的质粒，为什么有时候提取的质粒会出现比正常质粒电泳位置靠下有点像酶切过一样，怎么这么怪异？
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1楼 2009-12-27 10:31:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 12-27 12:11
反复冻融、降解等
提取的时候操作的手法总会有差异的，造成条带位置不一也是很正常的
总之，不经过线性化的质粒电泳，什么位置都可能出现
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2楼2009-12-27 12:00:22
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
不同的构象导致
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3楼2009-12-27 15:44:49
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j2

木虫 (正式写手)
1应该是降解造成的
2也是困惑我的问题，论坛里的高手说不线性化，质粒的位置不说明问题，什么情况都可能发生~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2009-12-28 11:34:37
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wsshforget

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2009-12-28 11:34:
1应该是降解造成的
2也是困惑我的问题，论坛里的高手说不线性化，质粒的位置不说明问题，什么情况都可能发生~

但是我一直放在冰箱里面怎么会降解呢？
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5楼2009-12-29 16:48:26
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个问题很复杂，很难解决~
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6楼2009-12-29 16:50:00
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.这与你提取质粒的过程有关，裂解太剧烈的话，可能会有这种现象，而且与酒精沉淀后质粒的干燥程度（或者说干燥时间长短）有关，之后的溶解程度也有一定的关系。假如是提完后立即电泳检测与你放置一段时间后检测就会是你说的那种情况。
2.质粒提取方法不同会造成这种结果，我曾经用土法提的质粒与用试剂盒提取的质粒结果就有一定的差别。要是你用同种方法提的话，我就不知道原因了。
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7楼2009-12-29 17:01:54
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wsshforget

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gaozx123 at 2009-12-29 17:01:
1.这与你提取质粒的过程有关，裂解太剧烈的话，可能会有这种现象，而且与酒精沉淀后质粒的干燥程度（或者说干燥时间长短）有关，之后的溶解程度也有一定的关系。假如是提完后立即电泳检测与你放置一段时间后检测就 ...

剧烈的话是因为质粒断裂造成的条带改变吗？干燥时间较长为什么会导致这种结果？
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8楼2009-12-31 16:37:41
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
干燥时间过长，加水溶解时容易产生这种现象，可能你刚加过水，溶解不完全，跑一次胶，然后与你放过夜后再跑胶，图片会有一些差异，我曾经跑过这样的，但是不影响下一步。不知道你的是不是这种情况。可以酶切后连一下载体试试
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9楼2010-01-01 19:16:05
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