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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】二次pcr条带不对
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yuanhui86

[交流] 【求助/交流】二次pcr条带不对

我是从基因组中调出300bp大小的片段，以基因组为模板p出的条带在300处，但是很淡，所以进行二次pcr，直接取pcr产物1微升为模板（因为很淡，没稀释），结果不在300出现条带，反而在100bp处有条带。请教原因。
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1楼 2009-12-25 15:30:45
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zzw1221

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
100处可能就是没扩出来，是引物二聚体吧，巢式pcr试试
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2楼2009-12-25 15:43:37
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ljwei_163

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
产物在电泳的时候能看到亮度的时候 你的点样量浓度在50ng/ul。
根据你的点样量可以计算你的产物浓度。
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3楼2009-12-25 16:31:41
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jasco

木虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 12-25 20:00
100bp是非特异性扩增条带，优化pcr条件试试看
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4楼2009-12-25 16:54:31
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
是不是你第一次p出来的就不是目的带？
我前几天碰到过这个，从一个cDNA文库中扩增一段组织特异性的基因，但第一次p出来的条带很淡，所以做了二次pcr，仍然很淡，大小貌似比较像。
然后拿去测序，结果根本不是我的目的带。两条引物中只有一条和p出来的产物完全配对，另一条不完全配对。
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生物资源交流QQ群：1044518333
5楼2009-12-25 17:05:04
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 12-25 20:00
建议优化一次PCR，不要做二次PCR，降低退火温度，降落PCR，增加循环数，都可以考虑
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6楼2009-12-25 19:50:03
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yeyw04

新虫 (小有名气)
★
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1.你的第一次可能不是目的条带
2.100bp肯定不是扩增结果，而是引物二聚体
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7楼2009-12-25 20:45:14
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