24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 559  |  回复: 6
当前主题已经存档。

yuanhui86

[交流] 【求助/交流】二次pcr条带不对

我是从基因组中调出300bp大小的片段,以基因组为模板p出的条带在300处,但是很淡,所以进行二次pcr,直接取pcr产物1微升为模板(因为很淡,没稀释),结果不在300出现条带,反而在100bp处有条带。请教原因。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzw1221

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
100处可能就是没扩出来,是引物二聚体吧,巢式pcr试试
2楼2009-12-25 15:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljwei_163

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
产物在电泳的时候能看到亮度的时候 你的点样量浓度在50ng/ul。
根据你的点样量可以计算你的产物浓度。
3楼2009-12-25 16:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 12-25 20:00
100bp是非特异性扩增条带,优化pcr条件试试看
4楼2009-12-25 16:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-25 20:00
是不是你第一次p出来的就不是目的带?
我前几天碰到过这个,从一个cDNA文库中扩增一段组织特异性的基因,但第一次p出来的条带很淡,所以做了二次pcr,仍然很淡,大小貌似比较像。
然后拿去测序,结果根本不是我的目的带。两条引物中只有一条和p出来的产物完全配对,另一条不完全配对。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
5楼2009-12-25 17:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 12-25 20:00
建议优化一次PCR,不要做二次PCR,降低退火温度,降落PCR,增加循环数,都可以考虑
6楼2009-12-25 19:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeyw04

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1.你的第一次可能不是目的条带
2.100bp肯定不是扩增结果,而是引物二聚体
7楼2009-12-25 20:45:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuanhui86 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 材料与化工调剂 10+11 下一站上岸@ 2026-04-10 36/1800 2026-04-11 10:26 by 89436494
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +21 好好休息好不好 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 16:58 by luoyongfeng
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +5 江淮北月 2026-04-05 5/250 2026-04-10 16:26 by 高维春
[考研] 314求调剂 +23 wakeluofu 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 15:31 by MOF_Catal
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +10 代fish 2026-04-09 10/500 2026-04-10 09:49 by potato妹
[考研] 考研二轮调剂 +8 故人?? 2026-04-09 8/400 2026-04-10 09:44 by 青梅duoduo
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分 +5 材化李可 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:00 by Lilly_Li
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +21 吃的不少 2026-04-05 24/1200 2026-04-08 16:47 by sunhuadong
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 325 调剂 +6 QQ小虾 2026-04-07 6/300 2026-04-07 15:17 by Ccclqqq
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
信息提示
请填处理意见