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冰点3058

银虫 (小有名气)

[求助] 一道复旦生化题!!求助!!

要调查某组织中某个基因的表达量,可以在mRNA 和蛋白质水平进行检测。一个基因在某组织中的表达量比较低,试问应该用哪些手段来检测。
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tanganney

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
冰点3058(金币+10,VIP+0):谢谢! 12-24 12:25
实时定量PCR是检测基因表达最灵敏,最可靠的方法。通过在试验过程中,实时监测荧光染料的信号变化,反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广(能达到5个数量级),因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是,由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内参基因,因此,每次实验只能检测少数几个基因的表达水平,若要检测大量基因,则工作量巨大,耗时长久。
通过简单的,经过优化的实时定量PCR体系,如SuperArray的RT2ProfilerTM PCR芯片,研究者可以同时研究大量基因,既可以进行某些特别感兴趣的信号通路的研究,也可以作为验证芯片结果的方法。


为了获得理想的实验结果,PCR芯片面临以下挑战:高特异性,高灵敏度和可重复性。高灵敏度或低检出限,在样品的总RNA量少,基因表达量低的情况下,也能检测出目的基因。高特异性,扩增产物严格保证基因特异性,避免非特异性产物,如引物二聚体的产生。可重复性,通过标准化的反应体系和实验方法,使得多人多次重复实验均能获得可靠的基因定量结果。
6楼2009-12-23 13:59:11
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hongdounv77

木虫 (著名写手)


sourthern westhern
2楼2009-12-23 08:20:43
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shenao_07

木虫 (著名写手)


采用基因标记法,或原子标记法都可以!
3楼2009-12-23 10:24:55
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zhujiumei

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
冰点3058(金币+5,VIP+0):多谢! 12-24 12:22
用real-time PCR检测mRNA的表达,用West-blot检测蛋白的表达。
4楼2009-12-23 10:44:31
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