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冰点3058

银虫 (小有名气)

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[求助] 一道复旦生化题！！求助！！

要调查某组织中某个基因的表达量，可以在mRNA 和蛋白质水平进行检测。一个基因在某组织中的表达量比较低，试问应该用哪些手段来检测。

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1楼2009-12-23 08:10:11

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tanganney

银虫 (小有名气)

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冰点3058(金币+10,VIP+0):谢谢！ 12-24 12:25

实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内参基因，因此，每次实验只能检测少数几个基因的表达水平，若要检测大量基因，则工作量巨大，耗时长久。
通过简单的，经过优化的实时定量PCR体系，如SuperArray的RT2ProfilerTM PCR芯片，研究者可以同时研究大量基因，既可以进行某些特别感兴趣的信号通路的研究，也可以作为验证芯片结果的方法。

为了获得理想的实验结果，PCR芯片面临以下挑战：高特异性，高灵敏度和可重复性。高灵敏度或低检出限，在样品的总RNA量少，基因表达量低的情况下，也能检测出目的基因。高特异性，扩增产物严格保证基因特异性，避免非特异性产物，如引物二聚体的产生。可重复性，通过标准化的反应体系和实验方法，使得多人多次重复实验均能获得可靠的基因定量结果。