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moonfaceout

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】定量选两步PCR和普通三步PCR差别很大吗

最近要做定量,看到好多人都是用两步PCR,没有延伸那一步,然后在退火那步检测荧光。那是不是两步的PCR做定量,检测的信号比一般变性,退火,延伸的PCR更准确,三步的是在延伸那步检测荧光对吧。不是很明白,那位战友帮忙解释一下。
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

路过,帮顶
2楼2009-12-23 10:30:05
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

嗯,我也有这种疑问
3楼2009-12-23 10:50:21
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qingfengwu

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
定量qPCR两步法的前提是你的引物非常好,基因的丰度非常高的情况下做。普通的一定要用三步法做定量qPCR。这样出来的结果才能稳定,可靠。
4楼2009-12-23 15:32:57
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

三步的是在延伸那步检测荧光是这样的。
5楼2009-12-23 15:33:31
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