【讨论】图位克隆 - 农林 - 农林综合 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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sobeit

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三个小石子(金币+2):感谢参与讨论，欢迎常来理工农林版！ 2010-09-08 23:31:42

首先你要筛选在双亲间具有多态性的标记，质量性状你可以当作一个多态性标记加入，然后再构建标记连锁图的过程中，这个质量性状一般会被定位在某两个标记之间，然后你需要在含有目标基因的染色体区段加密标记做精细定位，注意你要做精细定位需要的群体比较大，这样才能捕捉到标记和基因的重组，在做精细定位的过程中你会找到一些重组单株，就是标记和基因有重组的单株，挑出这些单株来进一步加密标记，在田间考察表型（注意种植亲本做对照），直到没有重组单株为止，这样你就获得了和基因紧密连锁的标记，然后构建文库，以这个标记筛选阳性克隆测序，利用软件预测ORF，然后功能验证。笼统来说基本就是这样吧。拟南芥基因组小而且已经有完整的序列，做起来是比较方便的。

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11楼2010-05-09 16:59:41

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Jack_dong

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谢谢各位朋友指点

我现在已经定位到目标基因了

谢谢

12楼2010-09-08 12:16:15

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我爱喝茶gr

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你定到目标基因就把你的方法和经验介绍一下吧，我们后来人也好学学啊，我现在也准备做这个，但很摸不着头脑，希望你介绍下你的学习过程和经验。

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13楼2010-09-15 09:49:22

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xute

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木虫/panda(金币+1): 鼓励交流，欢迎常来农林版 2011-09-20 13:11:25

应该是利用染色体步移的方法。利用分子标记不断的设计引物进行PCR，两条带的为COL和ler正常杂交，一条带的为不正常的。当LC出现的频率很少时可精细定位在20kb内。因为离目的基因越远，重组率越高。

这是我对图位克隆浅显的理解，不对之处请指教。

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永远都要相信自己，笑对生活！

14楼2011-09-20 08:34:57

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chenguestc

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 蒯平 at 2010-05-09 09:38:15:
是的，得需要紧密的连锁图谱，即利用你构建的F2群体做出的图谱，找到与该性状紧密连锁的区域，然后利用染色体步移的方法逐步逼近该性状基因！

正解。很全面，很好。

15楼2011-09-21 03:46:01

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hanyueguang

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下一步应该精细定位了。拟南芥网站提供分子标记，然后选定标记，设计合适的引物，可以是SSLP,或AFLP,dCADP,都可以利用起来，进一步判断连锁关系，缩小到一定范围，大约20KB的时候，就可以直接在网站上分析找到各个基因。我和你进度差不多，也在做这方面的。希望多多交流。

16楼2012-02-14 20:47:54

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半壶茶爷

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精细定位和粗布定位的原理是不是一样的啊只是范围缩小了？谢谢回复

17楼2014-01-08 23:01:45

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半壶茶爷

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wanhscn: 金币+1, 建议重新发帖提问！ 2014-01-10 20:39:35

F2群体是通过筛选出来的吗，F2的基因型是什么啊为什么会有一条带的col，混乱了

18楼2014-01-08 23:06:03

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