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sobeit

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
三个小石子(金币+2):感谢参与讨论,欢迎常来理工农林版! 2010-09-08 23:31:42
首先你要筛选在双亲间具有多态性的标记,质量性状你可以当作一个多态性标记加入,然后再构建标记连锁图的过程中,这个质量性状一般会被定位在某两个标记之间,然后你需要在含有目标基因的染色体区段加密标记做精细定位,注意你要做精细定位需要的群体比较大,这样才能捕捉到标记和基因的重组,在做精细定位的过程中你会找到一些重组单株,就是标记和基因有重组的单株,挑出这些单株来进一步加密标记,在田间考察表型(注意种植亲本做对照),直到没有重组单株为止,这样你就获得了和基因紧密连锁的标记,然后构建文库,以这个标记筛选阳性克隆测序,利用软件预测ORF,然后功能验证。笼统来说基本就是这样吧。拟南芥基因组小而且已经有完整的序列,做起来是比较方便的。
11楼2010-05-09 16:59:41
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Jack_dong

银虫 (小有名气)

谢谢各位朋友指点

我现在已经定位到目标基因了

谢谢

12楼2010-09-08 12:16:15
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我爱喝茶gr

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你定到目标基因就把你的方法和经验介绍一下吧,我们后来人也好学学啊,我现在也准备做这个,但很摸不着头脑,希望你介绍下你的学习过程和经验。
13楼2010-09-15 09:49:22
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xute

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
木虫/panda(金币+1): 鼓励交流,欢迎常来农林版 2011-09-20 13:11:25
应该是利用染色体步移的方法。利用分子标记不断的设计引物进行PCR,两条带的为COL和ler正常杂交,一条带的为不正常的。当LC出现的频率很少时可精细定位在20kb内。因为离目的基因越远,重组率越高。

这是我对图位克隆浅显的理解,不对之处请指教。
永远都要相信自己,笑对生活!
14楼2011-09-20 08:34:57
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chenguestc

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蒯平 at 2010-05-09 09:38:15:
是的,得需要紧密的连锁图谱,即利用你构建的F2群体做出的图谱,找到与该性状紧密连锁的区域,然后利用染色体步移的方法逐步逼近该性状基因!

正解。很全面,很好。
15楼2011-09-21 03:46:01
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hanyueguang

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
下一步应该精细定位了。拟南芥网站提供分子标记,然后选定标记,设计合适的引物,可以是SSLP,或AFLP,dCADP,都可以利用起来,进一步判断连锁关系,缩小到一定范围,大约20KB的时候,就可以直接在网站上分析找到各个基因。我和你进度差不多,也在做这方面的。希望多多交流。
16楼2012-02-14 20:47:54
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半壶茶爷

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
精细定位和粗布定位的原理是不是一样的啊只是范围缩小了?谢谢回复
17楼2014-01-08 23:01:45
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半壶茶爷

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wanhscn: 金币+1, 建议重新发帖提问! 2014-01-10 20:39:35
F2群体是通过筛选出来的吗,F2的基因型是什么啊为什么会有一条带的col,混乱了
18楼2014-01-08 23:06:03
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