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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】没有蓝斑，但是M13引物检测疑为自连，为何？
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LYZX

捐助贵宾 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】没有蓝斑，但是M13引物检测疑为自连，为何？

用pmd-18载体做的连接，菌长的不算好，有一半是空板，能挑的板长得还可以，也没有蓝斑，但是M13引物扩增后，电泳检测只有150bp，目标DNA没有成功连接，为什么？
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创造一个奇迹
1楼 2009-12-22 15:17:23
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-22 19:17
建议还是提取质粒，然后进行酶切验证，pcr验证不稳定，也许换换东西就能扩增出东西，最安全的还是酶切验证
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2楼2009-12-22 16:31:24
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
很可能是你连进去了一些小片段，根本不是你的目的片段，有时候也有可能是你显色的不够，是假的白斑，建议先在冰箱显色4h，再看看斑的颜色。
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3楼2009-12-22 23:52:31
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LYZX

捐助贵宾 (初入文坛)
了解了，谢谢~
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创造一个奇迹
4楼2009-12-23 03:13:22
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bioxixi

木虫 (著名写手)
冰箱里放置一段会出现蓝斑吧
T载体不会自连的吧，连入杂片段
会不会是你的PCR产物纯化出了问题
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5楼2009-12-23 08:15:02
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