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LYZX

捐助贵宾 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】没有蓝斑,但是M13引物检测疑为自连,为何?

用pmd-18载体做的连接,菌长的不算好,有一半是空板,能挑的板长得还可以,也没有蓝斑,但是M13引物扩增后,电泳检测只有150bp,目标DNA没有成功连接,为什么?
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创造一个奇迹
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tianpingpe

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-22 19:17
建议还是提取质粒,然后进行酶切验证,pcr验证不稳定,也许换换东西就能扩增出东西,最安全的还是酶切验证
2楼2009-12-22 16:31:24
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

很可能是你连进去了一些小片段,根本不是你的目的片段,有时候也有可能是你显色的不够,是假的白斑,建议先在冰箱显色4h,再看看斑的颜色。
3楼2009-12-22 23:52:31
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LYZX

捐助贵宾 (初入文坛)

了解了,谢谢~
创造一个奇迹
4楼2009-12-23 03:13:22
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bioxixi

木虫 (著名写手)

冰箱里放置一段会出现蓝斑吧
T载体不会自连的吧,连入杂片段
会不会是你的PCR产物纯化出了问题
5楼2009-12-23 08:15:02
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