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铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】反复P会不会突变

pcR 的模板没了,想用以前酶切后的PCR产物做模板,可是这样反复P,产物的酶切位点会不会突变,有没有人以前这样干过?效果怎么样啊?
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won7

金虫 (小有名气)


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PCR过程会出现错配的情况,但几率比较低。建议你先用高保真的酶做PCR后,再用作模板就保险一些。当然每次用高保真的酶是最好了。但是,有一个问题:你的PCR产物已经酶切过了,那一般是不能再作PCR模板了,如果你的PCR产物有酶切位点的话。
2楼2009-12-21 21:04:01
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apple-z

银虫 (小有名气)


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是的,可以用高保真的酶降低错配率
3楼2009-12-21 22:43:29
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

会.
用pfu降低错配
4楼2009-12-22 09:27:34
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luckydong1

铜虫 (小有名气)


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最好用高保真酶吧,PrimeStar比pfu更保真
5楼2009-12-25 11:00:43
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thinka

铜虫 (著名写手)


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二楼说得不对,你还是可以继续P的,酶切也只切掉保护碱基和酶切位点而已,只要把退火温度降低些就可以了,记得用高保真酶啊,构好载体后测序正确才是硬道理
6楼2009-12-25 11:04:15
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