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hhhwei2216

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于动物组织基因组提取的问题

本人要提高质量的鱼类组织的DNA,但是提出来的基因组的浓度不是很理想,而且还夹杂着核糖体RNA,如何避免RNA的产生,我后续需要包装DNA,所以对DNA的质量要求很高,浓度必须达到要求才能继续做,不知道各位有没有做过的,或者有没有专家帮忙分析一下,给予帮助。不胜感激
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
1949stone(金币+1,VIP+0):是的 12-20 20:26
hhhwei2216(金币+1,VIP+0): 12-26 19:37
避免RNA可能有点难,可以用RNase下。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-12-20 19:27:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 12-20 20:26
hhhwei2216(金币+1,VIP+0):谢谢交流! 12-26 19:37
hhhwei2216(金币+1,VIP+0): 12-26 19:38
由于Tris酚抽核酸时,DNA和RNA都是在水相中一起被抽提出来的,所以只有通过加RNase来去除
3楼2009-12-20 20:25:26
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hhhwei2216

木虫 (正式写手)

我是用酚氯仿提取的,protocol里面说是可以得到高质量的。
4楼2009-12-20 21:36:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


hhhwei2216(金币+1,VIP+0):谢谢,你的建议我会考虑,有机会再交流 12-26 19:36
引用回帖:
Originally posted by hhhwei2216 at 2009/12/20, 21:36:
我是用酚氯仿提取的,protocol里面说是可以得到高质量的。

但事实上就是会混入RNA,无法避免的。常规条件下,RNA并不影响使用,且RNA容易降解。但要很纯的DNA,就一定得用RNase。许多高端的DNA纯化试剂盒,比如Invitrogen的PureLink系列,都是含有RNase试剂的
5楼2009-12-20 22:42:30
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


hhhwei2216(金币+1,VIP+0):建议不错,我正在尝试自己的方法,谢谢交流 12-26 19:36
RNA的问题如楼上几位所说即可解决。关于高质量的DNA如何获得,给点小建议,可以将消化所用裂解液中的EDTA浓度提高至500mM,楼主应该使用的是10mM-100mM范围的裂解液,这是常规的DNA提取方法,如果想获得高质量DNA就需要提高EDTA的浓度,但是,这样就会使得到的DNA中EDTA的浓度过高,而影响后续实验,需要使用透析的方法将EDTA和钠盐透析掉,去买点透析袋,透析就可以了。如果嫌这种方法麻烦,可以反复多抽提几次,但是获得的DNA浓度会降低,所以溶解的时候要用特别少量的水或者TE。
6楼2009-12-21 20:42:56
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