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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-12-15 23:10:
1、直接种板不需爬片
2、尝试37度固定15min
3、每次PBS洗都不要冲,对着边缘的壁流下去覆盖孔,然后直接吸走,不需太长时间,洗两次足够
4、尝试37度染20~30min,如果着色很浅,33342是比较难染一些的
5、染完 ...

恩,好的,我用这个方法试试看哦,谢谢了哈!
我想问下,33342我是用水配成浓度为1mg/ml,我加到板里的时候,是用培养液还是有PBS稀释到终浓度为10ug/ml加到板里面啊?(每个孔应该加多少毫升啊?)
11楼2009-12-16 00:08:04
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小神300

新虫 (初入文坛)


richenim(金币+1,VIP+0): 12-16 10:17
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2009-12-15 22:05:


(1)其实是将细胞接种在破片上的时候就有大量的细胞不贴壁(我加了1ml的培养液,孵育了16h后)。我也不知道是为什么,细胞的数量也还可以,但就是不贴在玻片上。
(2)hochest33342是粉末的,我查的资料是先 ...

1、这样的话,是不是爬片(盖玻片)本身没处理好。我一般都是先泡酸过夜,洗净后蒸馏水冲洗多遍再烘干,高压。
2、直接六孔板接种,倒置显微镜观察的话底部太厚了吧,不过如果只是观察下可能也还好。
另外,观察凋亡的话建议你再染个核,如PI,凋亡的时候核的变化也是非常重要的
12楼2009-12-16 09:03:14
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 小神300 at 2009-12-16 09:03:




1、这样的话,是不是爬片(盖玻片)本身没处理好。我一般都是先泡酸过夜,洗净后蒸馏水冲洗多遍再烘干,高压。
2、直接六孔板接种,倒置显微镜观察的话底部太厚了吧,不过如果只是观察下可能也还好。
另 ...

盖玻片我也是先泡酸过夜,洗净后蒸馏水冲洗多遍再烘干,高压这样处理的哦
我想问一下,用PI核染是单独用PI染还是联合hoechest一起染啊?
13楼2009-12-16 10:17:34
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小神300

新虫 (初入文坛)

这两个染料可以一起染的
14楼2009-12-16 10:56:47
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