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[交流]
【求助/交流】蛋白质分离纯化
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各位大侠，请问凝胶柱层析和离子交换层析在蛋白质分离纯化过程中，一般先使用哪种？请解释一下原因。还有，可否使用两次不同的离子交换层析分离纯化蛋白？ 先谢过大家了！ |
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xingrl
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amisking(金币+5,VIP+0): 12-12 15:05
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所有的层析在原理上都是相通的，区别在于流动相和层析剂之间的作用力的不同。如何使用,还要根据你的目的和材料而定。这里将两种层析的原理介绍一下吧，希望对你有帮助。 离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用。离子交换层析分离蛋白质的过程,主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离。依靠增加缓冲液中的离子强度或改变pH值使蛋白质带不同种类和数目的电荷，改变蛋白质与离子交换剂的结合状况,从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物，必须根据其所含物质的解离性质，带电状态选择适当类型的离子交换剂，并控制吸附和洗脱条件（主要是洗脱液的离子强度和pH值），使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱下来。 凝胶过滤层析利用了凝胶的多孔性，根据溶剂分子的大小进行分离。 凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质，当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时，由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢，在缓冲液洗脱时，分子量大的物质不能进入凝胶孔内，而在凝胶间几乎是垂直的向下运动，而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行，这样就可以按分子量的大小，先后流出凝胶柱，达到分离的目的。 |
2楼2009-12-12 15:03:24
lxj341401
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3楼2009-12-12 17:26:11
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hare1212(金币+2,VIP+0): 12-12 20:42
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这要分情况而定。如果量比较大并且相对又比较纯的话，可以直接用离子交换（分子筛一般需要浓缩，要花掉很多时间）。如果量比较少并且杂带较多的话，就先过分子筛吧。当然每过完一次都要电泳检测一下纯度，如果比较纯就不要再过了。 一般来说优先选用分子筛，因为分子筛相对损失较少。当然如果目的蛋白和杂蛋白分子量相差较小的话就只能用离子交换了。 离子柱一般最多过两次（一次阳离子柱和一次阴离子柱），当然是在摸索好条件的情况下。正常情况下过一次就可以了，因为毕竟每次过之前都要脱盐，过柱的时候有很多也挂不到柱子上，损失太大。 以上仅供参考。 |
4楼2009-12-12 18:09:01