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kevin.wee

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做WB的虫友来帮忙分析下吧

昨天做了ubiquitin的WB检测,内参选用的是actin,曝光后结果如图。第一张图(WB-1)是预实验的图片,第二张(WB-2)、第三张(WB-3)正式试验的图。
WB-1:1-5为liver,6-10是spleen
WB-2: 1  Vehicle-1;2 liver-24h-sample-1;3 Vehicle-2;4 liver-24h-samle-2;
      5  Vehicle-3;6  liver-24h-sample-3.........9 Vehicle-5;10 liver-24h-samle-5。
WB-3: 1  Vehicle-1;2 liver-48h-sample-1;3 Vehicle-2;4 liver-48h-samle-2;
      5  Vehicle-3;6  liver-48h-sample-3.........9 Vehicle-5;10 liver-48h-samle-5。
wb-2和wb-3 的Vehicle 相同
样本的经蛋白定量后统一稀释到5ug/ul,然后加了上样缓冲液后浓度为0.65*5=3.25ug/ul,上样15ul,预实验和正式试验各方面参数哦是一样的。从这三张图可以明显看出蛋白定量不够准确,而且差异比较大。
但最主要问题还是第二张图V-3样本的actin表达太突出,第三张也是(因为用的是同样的Vehicle,大概可以排除操作问题吧),对照定量结果发现V-3匀浆中蛋白含量是最低的,因此我又重新做了次定量,结果整体要比初次的高,但是V-3还是最低的,这就让我很困惑:
两次定量结果V-3的蛋白含量都是最低的,为什么检测却actin表达却是最多的,Actin在肝组织不同位置表达差异会很大吗?
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kevin.wee

金虫 (小有名气)

这是第二张图
2楼2009-12-11 13:27:33
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kevin.wee

金虫 (小有名气)

这是第三张图
3楼2009-12-11 13:27:50
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