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kevin.wee金虫 (小有名气)
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【求助/交流】做WB的虫友来帮忙分析下吧
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昨天做了ubiquitin的WB检测，内参选用的是actin，曝光后结果如图。第一张图(WB-1）是预实验的图片，第二张（WB-2)、第三张(WB-3)正式试验的图。 WB-1:1-5为liver，6-10是spleen WB-2: 1 Vehicle-1；2 liver-24h-sample-1；3 Vehicle-2；4 liver-24h-samle-2； 5 Vehicle-3；6 liver-24h-sample-3.........9 Vehicle-5；10 liver-24h-samle-5。 WB-3: 1 Vehicle-1；2 liver-48h-sample-1；3 Vehicle-2；4 liver-48h-samle-2； 5 Vehicle-3；6 liver-48h-sample-3.........9 Vehicle-5；10 liver-48h-samle-5。 wb-2和wb-3 的Vehicle 相同 样本的经蛋白定量后统一稀释到5ug/ul，然后加了上样缓冲液后浓度为0.65*5=3.25ug/ul，上样15ul，预实验和正式试验各方面参数哦是一样的。从这三张图可以明显看出蛋白定量不够准确，而且差异比较大。 但最主要问题还是第二张图V-3样本的actin表达太突出，第三张也是（因为用的是同样的Vehicle，大概可以排除操作问题吧），对照定量结果发现V-3匀浆中蛋白含量是最低的，因此我又重新做了次定量，结果整体要比初次的高，但是V-3还是最低的，这就让我很困惑： 两次定量结果V-3的蛋白含量都是最低的，为什么检测却actin表达却是最多的，Actin在肝组织不同位置表达差异会很大吗？ |
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