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09yschen

金虫 (正式写手)

[交流] 【讨论交流】除蛋白质的方法

近来要除一些蛋白质,我想除了常用的乙腈和加热,还有什么方法好点,
用乙腈怕有干扰,有时很难除去多余的。用加热,会使样品中的水分损失。

请教……

[ Last edited by opq691 on 2009-12-12 at 23:46 ]
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houhl

金虫 (正式写手)

离心 电泳


opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流,欢迎常来分析版及专家版交流讨论 12-10 23:02
离心 电泳两种方法应该可以出去了
2楼2009-12-10 21:15:31
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09yschen

金虫 (正式写手)

我的样品本来就少,加入有机物离心除蛋白质,怕离心后,在除去过量的有机液体时,无论是使用蒸发还是氮气吹,都会损失一部分水,这样会使待测物的浓度上升。
用蛋白质的盐效应怎么样?
3楼2009-12-11 09:32:41
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
happy169(金币+3,VIP+0):专家奖励!!^_^ 12-11 14:07
opq691(金币+1,VIP+0):我弱问一个,呵呵,加入氯仿-辛醇沉淀蛋白是直接沉淀还是需要离心静置?跟帖或者直接回复我 谢谢 12-11 19:37
除蛋白质的方法很多,但是要注意加入的试剂会不会对你的分析造成影响,列举如下:
1、加热
2、加入乙腈
3、加入三氟乙酸
4、加入氯仿-辛醇
5、半透膜
通过半透膜是最保险的,因为不引入其他物质,但是费时费力;用氯仿-辛醇能够快速使蛋白质变成沉淀,即使是一些小分子量的蛋白质也能用此方法除去。
七窍通了六窍
4楼2009-12-11 10:44:33
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巫女子佩

金虫 (正式写手)

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happy169(金币+3,VIP+0):专家奖励!欢迎常来分析版 12-11 14:07
还可以超滤,但超滤价格高,滤膜有时候也对待测组分有吸附,需要仔细选择
或者是固相萃取,有专门除蛋白的柱子
这两种方法都比较贵,但是比沉淀法好用很多
5楼2009-12-11 11:12:55
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kele9955

木虫 (著名写手)

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opq691(金币+1,VIP+0):氯仿可以直接除去蛋白还是得离心? 12-11 19:27
除蛋白的方法很多了,但是也得考虑你的样品是哪一类的,比如对于生物碱,用氯仿既可以除蛋白,同时又萃取到里面的样品,非常合适,你的是什么呢?
昆嵛山的浪漫爱情传说,是今生你我的再次缠绵!
6楼2009-12-11 14:36:17
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kele9955

木虫 (著名写手)

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opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 12-30 14:37
得离心,其他的不也得离心才能行?你说呢?
昆嵛山的浪漫爱情传说,是今生你我的再次缠绵!
7楼2009-12-12 12:31:00
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jiang59430

银虫 (小有名气)

★ ★
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opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 12-30 14:38
现在好像渗透好像还很好啊,很多前处理都用这样方法的
8楼2009-12-30 13:12:41
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edward12101759

金虫 (正式写手)

★ ★
opq691(金币+2,VIP+0):谢谢回帖交流 12-30 14:38
需要看是从什么分离蛋白质....
一般第一步可以盐析,沉降大部分蛋白质,
然后加热(如果对样品没有破坏的话),
离心(如果样品和蛋白没有结合的话),
超滤(样品的分子量和蛋白的分子量有差异),
甚至还可以过凝胶柱(如果想进一步纯化)。
办法很多,看被测物质的性质了。
9楼2009-12-30 13:20:24
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liupps

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 09yschen at 2009-12-11 09:32:
我的样品本来就少,加入有机物离心除蛋白质,怕离心后,在除去过量的有机液体时,无论是使用蒸发还是氮气吹,都会损失一部分水,这样会使待测物的浓度上升。
用蛋白质的盐效应怎么样?

我注意到你强调自己的样品量少,考虑一下waters μElution提取板

μElution提取板专为少量体积的样品而设计,按照推荐方法,洗脱剂的体积可以低至25μL。低量的洗脱液可以直接进样,省去了耗时的挥发等步骤,缩短了样品制备的周期,增大了样品处理的能力。其中,Oasis HLB μElution提取板可用于寡聚核苷酸进行MS分析前的脱盐处理。


不是做广告。。。
10楼2010-01-22 12:49:17
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