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mourning

木虫 (正式写手)

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[资源] 【分享】利用疏水材质，节省抗体的WB新方法

WB(western blot)实验，为分子生物学经典实验之一。常用来进行蛋白分子量估算，蛋白功能研究等实验。

在该实验中，需要进行一抗、二抗及荧光底物孵育等过程。常规情况下将经过转印的PVDF膜等于玻璃皿中或者杂交袋中与抗体孵育。但是，在玻璃皿中孵育，常常使用抗体的量较大，且抗体回收导致抗体的质量下降；在杂交袋中孵育，虽然使用抗体较少，但是常导致杂交袋和转印膜（PVDF膜等）的表面相互摩擦，导致抗体抗原相互作用减弱，对于靶蛋白定量有较大的影响。

在实验过程中，经过逐渐摸索，发现一种新的方法抗原抗体孵育方法。

由于转印膜（PVDF膜等）为疏水性材质，可以将其与表面为疏水性的材质（石蜡膜parafilm等）放置在一起，将抗体滴加在转印膜表面，水平放置，于室温或者37摄氏度放置，进行抗原抗体反应。由于石蜡膜等材质的疏水性，致使抗体稀释液不会向转印膜的周围扩散，使滴加的抗体液一直保存于转印膜的表面，充分与抗原反应；同时，如果抗体十分珍贵且必须回收，将转印膜移去后，抗体依然可以回收。该方法使用一抗或者二抗的量十分少，仅500ul/20cm2左右（即25ul/平方厘米）。

具体的操作方法可以如下：
1. 将疏水性的材质，如石蜡膜，仅仅的贴附在玻璃等表面，保证其不会滑动。
2. 将PVDF膜正面向上，轻轻的放置于石蜡膜等疏水性材质的表面。
3. 保证转印膜不干燥的情况下，尽快滴加抗体。
4. 可以将上述玻璃板放置于湿盒之上，保证抗体稀释液不会在孵育过程中蒸发干。

图示如下：

目前所知，该方法最早来源于上海神经所段波博士。后经昆明动物研究所分子病理组改善。如擅自申请专利等，有任何法律责任，请自负。