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金虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR引物设计求助

想做RT-PCR,哪位帮我设计引物,是用来做real time 的。请不要随便找个软件或者网站设计贴上来,我需要设计的详细信息,比如引物从哪个位置起始的等等。请熟悉引物设计的牛人大虾帮我设计一下。
目的基因序列:
     1 atgaaaatca gttatctgga ctttgaacaa tcggttgcgg agctggatgc caaggtggag
       61 gaactccatg ccctgaatca gccgggtatc gccgatgaca tcagtcgcct ggaagtaaaa
      121 gcgcgcaagg agttgcagcg tatttacagc aagcttggtg cctggcagac ggtacaggtg
      181 gcccgtcacc cacagcggcc ttataccatg gattatgtgc aggccctttt cacggaagta
      241 caggtgctgg caggcgaccg tgctttcgcc gatgatcagg ctattatcgg cggtctggcg
      301 cgcttcaatg gacagccgat cgtctggatg ggacatcaga agggccgcga caccaaggaa
      361 aagattcagc gcaactttgg gatgccgcgt ccggaaggtt atcgcaaggc cttgcgtctg
      421 ctccgccttg ccgagcgttt tgccttgccg gtatttacgt tcattgatac gcccggagcc
      481 tatccgggta ttggtgccga agagcgcggc cagagtgagg ccatagcccg taatctcgca
      541 gtgatgtctg atctggcggt acccattatc tgcacggtca ttggtgaagg gggctccggc
      601 ggggccctgg cgattggcgt gggtgaccgg atgctgatgc tggagtatgg agtgtactcc
      661 gtcatttcgc cggaaggctg cgcctccatc ctctggaaga atgcggccat ggcagccgag
      721 gccgcggaaa ctctgggtat caccgcccgt cgtttgcaag gaatgggtct ggtcgatgaa
      781 gtgctggccg aacccctcgg tggcgcgcat cgcgatccgg aagcggtctt cgcgctggca
      841 cgtgagcgtt tcgcccatca cctgcaggag ctgcaggcga tggataccag caagttgctg
      901 accacccgtt acgaacgcct gatgcactat ggagtcgtcg gcgctgcctg a


内参基因序列:
   1 acgacttcac cccagtcatg aaccataccg tggtaaccgc cctcccgaag gttaggctag
       61 ctgcttctgg tacaatccac tcccatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac
      121 gtattcaccg cggcatgctg atccgcgatt actagcgatt ccgacttcat gcagtcgagt
      181 tgcagactgc aatccgaact acgacgcgct ttctggggtc tgctccacct cgcggcttgg
      241 cttccctctg tacgcgccat tgtagcacgt gtgtagccct ggacataaag gccatgagga
      301 cttgacgtca tccccacctt cctccggttt gtcaccggca gtctccctag agtgcccggc
      361 cgaaccgctg gcaactaagg acaagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc
      421 acgacacgag ctgacgacag ccatgcagca cctgtgttcc gattccccga agggcacttc
      481 cgcatctctg cagaattccg gacatgtcaa gcccaggtaa ggttcttcgc gttgcatcga
      541 attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca attcctttga gttttaacct
      601 tgcggccgta cttcccaggc ggaatactta tcgcgttagc tacgacactc agtacgctag
      661 gcaccaaaca tctagtattc atcgtttagg gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt
      721 tgctccccac gctttcgtgc ctcagcgtca gtattgggcc aggtggccgc cttcgccact
      781 gatgttcctc cagatctcta cgcatttcac cgctacacct ggaattccac caccctctcc
      841 catactctag tacaccggtt tccaccgcca ttcccaggtt gagcccgggg atttcacgac
      901 agacctaacg taccgcctac gcacccttta cgcccagtga ttccgattaa cgcttgcacc
      961 ccccgtatta ccgcggctgc tggcacggag ttagccggtg cttcttcttg gattcacgtc
     1021 aatagcagat tgtattagaa cccacctttt cgtcctccac gaaaggactt tacaacccga
     1081 aggccttctt catccacgcg gcattgcttc gtcagggttg cccccattgc gaaaaattcc
     1141 ccactgctgc ctcccgtagg agtctgggcc gtgtctcagt cccagtgtgg ctggtcgtcc
     1201 tctcagacca gctaccgatc gtcgccttgg tgggccttta ccccgccaac tagctaatcg
     1261 gacgtaggct cctctcttag cgcgaggtcc gaagatcccc cgctttcccc ctcagggctc
     1321 atgcggtatt agcccaagtt tccctgggtt gtcccccact aaaagacaga ttcctacgca
     1381 ttactcaccc gtccgccact cgtcagcatc cgaagacctg ttaccgttcg acttgcatgt
     1441 gttaggcatg ccgccagcgt tcaatctgag
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