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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用lowry法测量蛋白浓度有亚硫酸钠影响怎么办？
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】用lowry法测量蛋白浓度有亚硫酸钠影响怎么办？

最近用lowry法检测样品中的蛋白浓度，
但是样品中含有亚硫酸钠，实验测定过程中发现亚硫酸钠对样品测定有干扰，使测量结果偏大很多，请问有没有做过这个的高手帮忙解决？拜托了……
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1楼 2009-12-07 11:23:56
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢，不过我这个问题更麻烦，我这个是样品中蛋白含量比较低，大概有0.1%左右，并且样品粘度很大，测定的是里面总蛋白的含量，如果用液相的话那检测波长不好控制，只有280nm检测么？ 12-10 16:33
楼主的问题我们遇到过类似的了，我们的蛋白辅料中有精氨酸和组氨酸，对Lowry测定干扰很大，我们就把蛋白测定的许多方法摸索了一遍，包括改良Lowry、紫外、Bradford、双缩脲等，亚硫酸钠是还原剂，BCA法也被排除了，最后还是用HPLC定的浓度
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
2楼2009-12-08 10:09:51
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):恩，谢谢，还是没有别的好的办法，用紫外的话，样品在260nm，280nm都有一定的紫外吸收，对测量有影响，不能准确测定蛋白含量，谢谢你的参与，有机会接着交流 1-7 10:25
lz要测总蛋白的话那就不好说了，RPHPLC很容易就把各种峰给分开了，分不清哪个峰是蛋白峰，总蛋白量不好计算，而且黏度大对柱子的损害比较大，lz的蛋白含量太低，Bradford、双缩脲的检测限太高，唯一的方法就是紫外了，可以试一下，或者楼主找到了更好解决的办法欢迎赐教
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
3楼2009-12-23 09:45:34
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edward12101759

金虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢参与，我们测样品的含量就是用的凝胶色谱，但是用它测量样品中的蛋白含量的话困难还不小。 1-7 10:26
对我们用HPLC测蛋白还出现前后出峰不一致的情况，总蛋白数用HPLC还是比较难。要是大分子蛋白可以考虑凝胶色谱，那个处理粘度大的大分子还是比较好，但就是比较贵...也欢迎LZ交流
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4楼2009-12-23 09:51:16
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