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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助:重叠pcr

请达人指点:
   两段片段分别是600,和700bp, 重叠PCR按照两部进行,第一步第二步扩出来了,回收了产物。第三步两个模板互相作用,一直扩不出来!
混合模板严格要求摩尔比1比1吗?那还要测浓度?可是我的浓度可能太低,分光光度计测不出来!
直接pcr,60-72都拭了,没有结果!不知道怎么解决,头疼!请高人指点,谢谢!
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
重叠延伸的第一步第二步,有固定的程式么?
没有吧,每个人都不大一样
混合模板无所谓比1比1,因为你定量方法这个也不准的
可能还有一些关键因素你没把握好
小木虫之有关部门负责人
2楼2009-12-05 19:58:13
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

你第二第三步怎么做的
说说看啦
小木虫之有关部门负责人
3楼2009-12-05 19:59:31
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qqsvery

木虫 (著名写手)

浓度肯定要测啊~如果浓度不一致,岂不是会产生不对称PCR效果啊!用nd-1000-v3测就行了~
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
4楼2009-12-05 23:07:15
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