【交流/求助】关于琼脂糖电泳的问题 - 分子生物 - 综合其他

严于律己，宽以待人

11楼2009-12-07 17:18:32

最爱花诗雨

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Originally posted by liyong1981 at 2009-12-4 09:50:
感觉是质粒浓度太低了，多摇摇在提

质粒浓度在100+，应该不是浓度的问题吧

严于律己，宽以待人

12楼2009-12-07 17:21:07

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Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-12-3 21:20:
挑单菌落转点是什么意思？抽出来的质粒浓度怎么样？

电转过后菌长的很密集，所以挑选其中的单菌落进行培养，质粒浓度在100+

严于律己，宽以待人

13楼2009-12-07 17:25:51

qiang84zhang

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我一直认为电转的效率还没有氯化钙法高，如果质粒浓度够的话，我想很可能出现了假阳性，要重新挑菌。这个很正常，一次多挑几个菌！

14楼2009-12-07 17:58:16

sunpl2323

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

如果质粒都没有那就是假阳性有质粒没有目的条带可能是质粒自连了我也经常遇到这种情况

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15楼2009-12-09 20:06:02

jlzkchong

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首先要确定你的酶切反应条件合理，主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点，若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话，就排除质粒浓度太低的因素，这样我怀疑你前期PCR过程中，酶切位点突变了，你可以在目的片段和载体上面找几个酶切位点单酶切验证一下，看看是不是酶切位点发生突变，若是这种原因，那么你需要重新做PCR扩增目的条带，或者需要重新设计引物~

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16楼2009-12-09 20:35:09

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引用回帖:

Originally posted by jlzkchong at 2009-12-9 20:35:
首先要确定你的酶切反应条件合理，主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点，若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话，就排除质粒浓度太低的因素，这样我怀疑你前期PCR过程中，酶切位点突变了，你可以在目的片段 ...

我没有做PCR，质粒是已经构建好的，直接电转进E.coli 然后提取的质粒进行的酶切鉴定

严于律己，宽以待人

17楼2009-12-11 20:19:30