24小时热门版块排行榜    

查看: 843  |  回复: 16
当前主题已经存档。

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

引用回帖:
Originally posted by jinran at 2009-12-4 09:13:
我也觉得是不是质粒的质量,或不好转染没有做好

质粒浓度在100+,应该不是浓度的问题吧
严于律己,宽以待人
11楼2009-12-07 17:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-4 09:50:
感觉是质粒浓度太低了,多摇摇在提

质粒浓度在100+,应该不是浓度的问题吧
严于律己,宽以待人
12楼2009-12-07 17:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-12-3 21:20:
挑单菌落转点是什么意思?抽出来的质粒浓度怎么样?

电转过后菌长的很密集,所以挑选其中的单菌落进行培养,质粒浓度在100+
严于律己,宽以待人
13楼2009-12-07 17:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiang84zhang

银虫 (正式写手)

我一直认为电转的效率还没有氯化钙法高,如果质粒浓度够的话,我想很可能出现了假阳性,要重新挑菌。这个很正常,一次多挑几个菌!
14楼2009-12-07 17:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunpl2323

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果质粒都没有 那就是 假阳性 有质粒 没有目的条带 可能是质粒自连了 我也经常遇到这种情况
15楼2009-12-09 20:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlzkchong

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先要确定你的酶切反应条件合理,主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点,若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话,就排除质粒浓度太低的因素,这样我怀疑你前期PCR过程中,酶切位点突变了,你可以在目的片段和载体上面找几个酶切位点单酶切验证一下,看看是不是酶切位点发生突变,若是这种原因,那么你需要重新做PCR扩增目的条带,或者需要重新设计引物~
16楼2009-12-09 20:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

引用回帖:
Originally posted by jlzkchong at 2009-12-9 20:35:
首先要确定你的酶切反应条件合理,主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点,若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话,就排除质粒浓度太低的因素,这样我怀疑你前期PCR过程中,酶切位点突变了,你可以在目的片段 ...

我没有做PCR,质粒是已经构建好的,直接电转进E.coli 然后提取的质粒进行的酶切鉴定
严于律己,宽以待人
17楼2009-12-11 20:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 最爱花诗雨 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求调剂 +6 chuanzhu川烛 2026-03-18 6/300 2026-03-22 19:39 by 公瑾逍遥
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
请填处理意见