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lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 再问关于EMSA的问题

上次发帖问过有关EMSA的问题,现在又有一些不太清楚的地方,请教大家
1.DNA探针的长度一般设计多大啊,因为我不清楚binding site具体位置,可以设计到500bp吗?
2.探针的标记为什么都是生物素或同位素标记啊,不可以用荧光标记吗?是不是灵敏度不够啊?
谢谢大家
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tuwenwuguan

新虫 (正式写手)

我是用荧光基团fam标记的,没有淬灭呀,还是有荧光,但是却看不到binding的带子,怎么回事啊?是不是蛋白加入太少了,我加了1umol蛋白
4楼2010-01-19 15:01:25
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-3 17:44
lihaoexe(金币+2,VIP+0): 12-3 20:21
探针越短越好,500太长了,跑不开的。你这要跑多久才能分开,才能开到shift啊。

不能用荧光材料,你这是做压膜或者扫磷屏。

去看看原理吧。
2楼2009-12-03 15:46:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lihaoexe(金币+2,VIP+0): 12-3 20:21
标Cy3或者FITC一类,在你跑的过程中不早就淬灭了……
3楼2009-12-03 18:24:19
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