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yindongxue

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:培养基培养拟南芥

谁有用培养基种植拟南芥的详细方法?和种植中的注意事项?
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lboo7

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-2 11:36
yindongxue(金币+1,VIP+0): 12-3 08:34
首先,所有的器皿都要在超净台中用紫外灭菌,用酒精擦拭超净台。用MS培养基。
1.用1ml70%酒精在EP管中上下颠倒囍5分钟。
2.0.1%的HgCl2处理3分钟,大概要60微升。
3.用双蒸水洗3-6次,每次用水1ml
4.待种子下沉,用滤纸吸干水分。
划线,在培养基上呈现出大概1平方厘米的方格,以便以种植。
5.用10微升的小墙头点平板,点在方格的中心或相交线上,一定要在超净台中吹干,以防污染。
6.用封口膜封好,用报纸包好,在4度放置2-3天春化,利于萌发,然后再放在人工气候箱中培养。
大概10天左右就可以移栽了(要是情况而定)
2楼2009-12-02 11:22:43
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lboo7

银虫 (小有名气)

种拟南芥

首先,所有的器皿都要在超净台中用紫外灭菌,用酒精擦拭超净台。用MS培养基。
1.用1ml70%酒精在EP管中上下颠倒囍5分钟。
2.0.1%的HgCl2处理3分钟,大概要60微升。
3.用双蒸水洗3-6次,每次用水1ml
4.待种子下沉,用滤纸吸干水分。
划线,在培养基上呈现出大概1平方厘米的方格,以便以种植。
5.用10微升的小墙头点平板,点在方格的中心或相交线上,一定要在超净台中吹干,以防污染。
6.用封口膜封好,用报纸包好,在4度放置2-3天春化,利于萌发,然后再放在人工气候箱中培养。
大概10天左右就可以移栽了(要是情况而定)
3楼2009-12-02 11:23:42
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lzhwin

木虫 (正式写手)


yindongxue(金币+1,VIP+0): 12-3 08:36
和楼上基本一样。第二部也可以不用氯化汞,70%乙醇1分钟后加入者50%漂渍液10分钟,期间不断上下颠倒,然后无菌水洗5次以上去掉残留的漂渍液
不知道楼主在平板种拟南芥的目的是什么,如果是为了转基因筛选应该不用像楼上那样画线点种(恐怕要累死了),可以用0.1%的灭菌琼脂将种子悬起来,然后用1ml枪头吸起来均匀的铺在平板上即可。农杆菌侵染花序的转化率不高,适当多撒点种子。
4楼2009-12-02 11:55:31
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yindongxue

铜虫 (初入文坛)

春化后培养皿上的封口膜还用拆下来吗?
5楼2009-12-03 08:38:35
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