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tianhua木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】急求助液相鬼峰问题，试了一个星期了，还是没解决
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各位HPLC站友： 你好！ 我在做一个中药指纹图谱的过程中，碰到了许多鬼峰，请大家都帮我分析与出出主意，谢谢先，我的问题是： 我在做指纹图谱过程中，采用的流动相是乙腈和水，梯度条件为： 0－10min：2%乙腈,10－20min：2%－18%乙腈；20－25min：18%－35%乙腈；25－35min：35%乙腈；35－55min：35%－75%乙腈；55－60min：75%－100%乙腈；60－90min：100%乙腈；90.01－120min：2%乙腈。波长为203nm，柱温35度，进样量：20ul。色谱柱为AlltimaC18柱（250×4.6mm，5um） 现在我在进一针蒸馏水，采用上述色谱条件进行分析，结果每次在25－30min位置会出现许多分离度很好的6到7个鬼峰（如09112301.D）. 首先，我要说明的是： 1 我的方法是别人给的，别人已经做出来进蒸馏水是基本没有峰出现的，所以方法是绝对没问题的。 2 我采用的色谱柱是新买的，而且在别的项目组的安捷伦1100上用过，也是没问题的,而且它们的流动相跟我们是完全一样的。但我们用它在我们这边三台安捷伦1100做都会在相同的位置出现几乎一样的鬼峰，现在基本上确定是我们的三台仪器长期维护不当而都产生了污染了，因为用我们的仪器做别的波长也不会有问题，所以也可以确定这种污染物在很低的波长下（203nm）有较强的干扰。 后面打听我有别的项目组以前也出现过类似的鬼峰，它们是不断的用甲醇－乙腈－异丙醇－乙腈－甲醇循环冲洗系统一天，后面鬼峰面积会越来越小，直到没有。所以我也就按照它们的方法冲洗了整个系统2天，别外，根据安捷伦工程师建议在这之前还用5%硝酸冲洗过系统（没接柱子），结果不但问题没有得到解决，反而出现新的问题了，我们现在采用原有的色谱条件进蒸馏水时，它会在约15min位置基线明显成线性往上升，成台阶状，而且后面的基线也不会下来，总在200mAU高度水平（如图09112906.D）。 请大家给我出出主意，现在我该如何清洗这个系统，我觉的我冲洗的够长的时间了，都快一个星期了，难道还没干净吗？另外，为什么我采用上述冲洗方法会出现15min位置基线明显成线性往上升的情况，而且后面基线都偏离0水平线较高的位置波动？ |
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虫友不要着急： 我觉得有以下几点值得注意： 1.流动相问题，既然方法没问题，就需要考虑是不是流动相不尽相同呢？特别是水，及时是相同级别的水，状况也不会是一样的，比如说前两天在本版块热烈讨论的哇哈哈水做HPLC的问题，有的仪器可以用有的不可以，说明还是质量状况不同吧！你配流动相用的试剂都没问题吧？ 2提到了仪器污染，假设冲洗用的试剂也是有问题的你冲洗多少时间都没用！ 3硝酸清洗，你水置换的时间足够吗？基线飘逸是不是因为系统内残留的酸使得PH值有所变化引起的？ 4还得判断鬼峰的来源，到底是柱子问题还是水的问题。可以不进纯化水，进乙腈：水=1：1的，2：1的观察鬼峰的峰高是不是有变化！ 继续关注！！ |
5楼2009-12-02 10:13:04
