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350784478

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么目的条带没有出来?

我最近在做western blot,用的是0.22PVDF膜,我的目的蛋白大小是180Kd,做了好几次了,都没有看见目的条带,我想问一下,是不是我的PVDF膜的孔径太小了?
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朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
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350784478

木虫 (正式写手)

[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009/11/29 17:02:
180kD啊……不好做
低电压低温转膜过夜试试吧,我怀疑是没转上去。你可以看看预染marker的转膜情况。
尝试在电转液里面加不超过0.1%的SDS
(你是用湿转吧,这么大的蛋白干转是绝对挂的……) [/quote
我用的是湿转,我看170的MARKER 都转上去了,难道是我的一抗问题?
但是之前做免疫细胞化学的时候,抗体是没有问题的。晕
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
3楼2009-11-30 10:43:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 11-29 19:25
350784478(金币+2,VIP+0):虽然不是我想要的,但是还是要感谢你的回答。 11-30 10:43
180kD啊……不好做
低电压低温转膜过夜试试吧,我怀疑是没转上去。你可以看看预染marker的转膜情况。
尝试在电转液里面加不超过0.1%的SDS
(你是用湿转吧,这么大的蛋白干转是绝对挂的……)
2楼2009-11-29 17:02:04
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