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汕头大学海洋科学接受调剂
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lij2

金虫 (小有名气)

[交流] 去磷酸化体系

最近要将载体去磷酸化,用TOYOBO的碱性磷酸酶,找不到说明书了,不知道体系是怎么样的,请用过的同仁指点一下,体系怎样,作用多久,谢谢~
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


lij2(金币+1,VIP+0):拜谢~ 12-1 13:11
去磷的时候质粒我没有定过量,只是按照经验,跑胶的时候如果质粒带比较亮浓度比较大就少加一点40体系加个15ul左右吧,如果浓度比较低的话就多加点,毕竟去磷后的损失还是蛮大的。
6楼2009-11-30 21:58:49
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-28 22:17
lij2(金币+1,VIP+0):请教一下有用50℃的是怎么回事? 11-29 09:16
以20总体系为例:
CIAP Buffer:4ul
CIAP:4ul
dd水:17-12ul
酶切过的质粒:15-20ul
30℃ 30min,37℃ 30min。
质粒的量根据浓度做相应的变化。
4楼2009-11-28 22:13:33
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


lij2(金币+1,VIP+0):谢谢,最后一个问题,质粒的量是多少,不会不管浓度吧?! 11-30 10:51
50℃效率也很高,可能个人习惯不一样吧!50℃也可以的。
5楼2009-11-29 12:18:00
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