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【求助】有没有人做单糖的HPLC,求助一下~
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| 我现在做单糖的液相色谱，用的是C18柱，想用PMP衍生化单糖，对照品是葡萄糖、果糖和木糖，对照品在同一个时间出峰，混标也只有一个峰，水相增加之后之后也是一个峰，只是保留时间变了，有没有做过的，帮我分析一下啊~~谢谢啦~ |
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| 取样品40μl置于2ml离心管中，加入0.25mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)甲醇溶液40μl和0.2mol/L NaOH溶液40μl，涡旋30秒钟后置于70℃水浴30分钟，取出室温放置10分钟，再加入0.2mol/L盐酸溶液40μl中和，涡旋30秒钟后用乙酸异戊酯0.32ml萃取，涡旋3分钟，12000rpm高速离心5分钟，小心弃去上层有机层，再萃取一次得下层水层，加氯仿0.32ml同法萃取一次，小心弃去下层，取上层水层，即样品衍生化液，进行HPLC分析。 |
3楼2009-11-27 17:22:21
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lcyhappy(金币+1,VIP+0): 11-27 14:45
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方法不对，可以用以下方法试一下。 配制单糖浓度为2mg/ml的对照品溶液，取该溶液80ul至于5ml离心管中，0.5mol/L的PMP甲醇溶液80ul和0.3mol/L的NaOH溶液80uL，涡旋30s后置与70℃水浴30min，取出室温放置10min，再加入0.3mol/L的盐酸溶液80ul中和，涡旋30min，加0.5ml氯仿萃取3次，小心弃去下层氯仿层，4500 r/min高速离心5min，取上层水层进行HPLC分析(Phenomenex C18，250mm×4.6mm，5µ；流动相A：乙腈-20mmol/L的乙酸铵水溶液（15：85），B：乙腈-20mmol/L的乙酸铵水溶液（40：60），梯度洗脱，0→20min，B的体积分数由0→60%；检测波长：245nm；流速：1.2ml/min；进样量：20µL)。其保留时间分别为tR/min：D-葡萄糖（20.10），L-鼠李糖（16.10），D-半乳糖（20.74），L-阿拉伯糖（21.73）。 |
2楼2009-11-27 10:53:50