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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] 重组质粒pcr的假阳性

在转化板上挑取单克隆,液体培养后提取质粒。
奇怪的是电泳显示没有提取到条带,都是弥散的。
用这样的“质粒”样品做pcr验证,得到了很亮的目的条带
想请问大家,是假阳性的概率大不大?
为什么会造成这样的结果呢?

ps:插入的目的片段是个小片段。
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的质粒提取完成后跑胶,最好出现三条带,离点样孔最近的的是提取过程中破碎的片段,依次是开环产物,跑的最快的环状质粒也是你所需要的。
天行健,君子以自强不息地势坤,君子以厚德载物
10楼2009-11-30 20:21:05
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grief

铜虫 (初入文坛)

★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 11-27 16:28
我做的也是个终止子的小片段插入,菌落PCR结果很亮,阴性对照也出现了目的条带,就是酶切切不出来,做了许多次都郁闷了。现在改了实验方案,把终止子后面加了些,总共600多bp,再看情况会怎么样?
等待秋天
3楼2009-11-27 10:33:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-27 16:28
wordsworth3180(金币+1,VIP+0):xiexie 11-29 20:57
还是测序看看吧,另外可以换个试剂盒试试,看是否是试剂盒的问题。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-11-27 10:59:03
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漫迹

金虫 (小有名气)

★ ★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-27 16:29
wordsworth3180(金币+1,VIP+0):3q 11-29 20:58
是不是质粒提取的操作有的地方不对啊,提出的质粒不是很纯,或者是电泳的影响也有可能吧
5楼2009-11-27 13:28:51
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