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RAPD技术研究进展
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RAPD技术研究进展 时间：2005年04月03日 中药材种类繁多，资源丰富，然而来源复杂，有的品种混淆不清。多年以来，我国一直运用经典形态分类方法来研究药材来源，如基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等。传统的中药鉴定方法难免存在主观性强，重复性和稳定性差等缺点。DNA分子遗传标记技术具有快速、微量、特异性强且不受发育生长阶段、供试部位、环境条件的影响，在中药鉴定领域显示出了良好的前景。随机扩增多态DNA（RAPD）技术是新发展起来的一种分子标记法，在上个世纪90年代得到了迅速发展。RAPD技术的基本原理基于生物之间的本质差异在于生物之间的遗传基因的差异，而这种差异在特定的物种内是相对稳定的。因此，以基因型作为生物类中药鉴定的依据更加客观准确。目前，RAPD技术的中药分子鉴定在以下几个方面取得了突破。 中药品种的鉴定 不同种中药之间的鉴定。采用RAPD技术可以对12个贝母样品进行亲缘关系研究，在对不同的样品扩增产物进行分析时发现，同一种内不同个体之间有较小的差别，种间差异大于种内差异，引物OPF-06扩增片段。在贝母内具有高度的稳定性，可能为贝母属的特征性片段。 同属中药的鉴定。采用RAPD技术对葛属6种植物进行分析，从DNA指纹图谱上可以看出，各植物之间有明显的差异，RAPD扩增反应产生的DNA指纹图谱可作为中药葛根及同属植物鉴别的依据。RAPD技术还可将国产姜黄属10种植物分为6组，初步澄清了姜黄属植物的一些分类学争议。对木兰属的8种生药运用RAPD技术进行鉴定研究，也取得了较好的效果。 易混淆中药的鉴别。珍稀名贵中药是生药品种混乱及伪劣药材出现的高频区。不少珍稀品种如冬虫夏草、番红花、石斛等来源有限，采用RAPD技术，显示了独特优势。运用RAPD技术对阳春砂及其常见的姜科植物伪品进行鉴别分析，结果表明，RAPD技术显示了良好的分辨率，所选引物能将阳春砂及伪品分开，阳春砂及其常见伪品各自均表现出其独特的RAPD标记。利用RAPD技术产生的DNA指纹图谱结合TLC法可鉴定牛蒡子及其常见混淆品。此外，用该法对石斛属内26个种和金石斛属的一个各进行基因组DNA多态性分析，根据筛选到的DNA片段序列，可以得到所需的特异性产物，方便、快捷地鉴别出铁皮石斛。 动物类中药的鉴定 RAPD技术不仅可以用于蛇类动物种间系统演化、种内个体间遗传多样性的分类研究，并且可以用于蛇类中药材的鉴定。该方法也可以对以动物粉末、体液分泌物和排泄物入药的生药及制剂进行有效的鉴定、纯度检查与质量评价。这类中药有鱼鳖胶囊、纯蛇粉、鹿血粉、犀角粉、水牛角粉、麝香、龟板、鳖甲、鸡内金、鸭内金、鹿鞭、鹿茸、驴鞭、牛鞭、梅花鹿血等。 药材道地性的鉴定 道地药材与非道地药材物种来源一致或十分相近，在形态生药性状及化学成分等特征上具有高度相似性，因而道地药材的鉴别往往不容易，具有很大的主观性。通过RAPD技术，可以发现同一地方冬虫夏草样品遗传差异甚微，同一区域不同地方的冬虫夏草样品间的遗传差异较大，不同区域的则遗传差异最大，这为冬虫夏草的道地性研究提供了支持依据。因此，通过比较不同居群间在遗传物质DNA上的变化，可为揭标“道地”药材的“地道”之本质提供线索，对于我国建立道地药材基因库有重大意义。 野生与家种生药鉴定 一般认为，野生品比栽培品品质好，同时，由于经济利益的驱使，以栽培品冒充野生品的现象时有发生。栽培品和野生品都来自同一个物种，植物形态、药材性状、化学成分、生物活性等往往无明显的差异，DNA分子遗传标记因不受药材生境条件的影响，在野生品与栽培品的比较研究方面有良好的前景。目前，采用RAPD技术，能有效区别野山人参和栽培人参、野生姜黄和栽培姜黄、野生天麻和栽培天麻。这说明能够在分子水平上刻画野生与栽培品遗传背景的DNA指纹图谱差异，为栽培品与野生品中药鉴定以及筛选和开发野生中药材优质种质资源提供重要的参考。 目前，RAPD技术的应用还主要表现在中药鉴定方面，在中药学研究深度和广度方面还有很大的局限性。但可以预见，随着分子生物学的发展，新的分子标记技术还将不断问世。利用分子遗传标记技术，开展有关药用动植物遗传背景与化学成分相关性的研究，实现中药的品种-质量标准化，基因工程生产天然活性成分及寻找和扩大新药源，开展中药重要性状包括品质、产量和抗性的分子标记，实现中药材分子育种及品质人工调控将是中药分子鉴定学富于挑战而又有现实意义的重大课题。 来源：中国生物技术信息网 |
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