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【求助】求助:蛋白为RNases,表达在包涵体中,相关问题??
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| 我的蛋白为RNases,表达在包涵体中,理论上有4对二硫键,8个游离巯基。我把包涵体溶在8M脲中,然后加入5mMDTT,还原过夜。然后用 AEMTS终浓度100mM烷化1h做MALDI-TOF。结果显示烷化上了6个游离巯基。请问是烷化条件不够还是DTT没有将包涵体的二硫键全部还原?还是蛋白本身构象问题使一个二硫键埋在内部,DTT作用不到?急,求救! |
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