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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[交流] cDNA

cDNA,编码区,ORF,3',5'到底有什么分别,具体是什么?

[ Last edited by amisking on 2009-11-22 at 21:09 ]
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fengweixing00

木虫 (小有名气)

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amisking(金币+7,VIP+0): 11-22 21:08
  cDNA
  为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。
  cDNA文库的构建
  分为六个阶段:
  阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链
  阶段2:cDNA第二链的合成
  阶段3:cDNA的甲基化
  阶段4:接头或衔接子的连接
  阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA
  阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接
2楼2009-11-22 20:59:08
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