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科研战神来了新虫 (小有名气)
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材料血液相容性怎么评？溶血实验避坑 + 标准化流程
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一、采血与红细胞分离洗涤 使用 EDTA 紫色抗凝管采集血液样本，样本可置于4℃冰箱暂存，24 h 内完成全部实验，也可直接进入离心洗涤流程。 设置离心参数3000 rpm，20 min，离心完成后，排空枪头，小心吸取并弃去上层上清液。 加入2 倍体积预冷 PBS重悬红细胞，再次以3000 rpm，20 min离心，弃除上清，重复洗涤操作，直至上层 PBS 澄清无色。 二、分组孵育 吸取20 μL 压积红细胞，吸取操作时排空枪头，插入管底缓慢吸取，移出枪头动作保持平缓，将红细胞转移至 1.5 mL EP 管内。 向 EP 管中加入1 mL PBS 分散的待测材料，轻柔混匀。 同步设置对照组：阴性对照：20 μL 红细胞 + 1 mL PBS阳性对照：20 μL 红细胞 + 1 mL 纯水 三、溶血率检测与计算 体系孵育至预设时间后，3000 rpm，20 min离心。 吸取上清：使用酶标仪检测对应波长下 OD 值，计算溶血率。 溶血率计算公式：溶血率（%）=（实验组 OD − 阴性对照 OD）/（阳性对照 OD − 阴性对照 OD）×100%溶血判定参考：溶血率控制在5% 以内。 四、样本拍照制样 提前准备衬纸，在放置 EP 管的位置粘贴双面胶用于固定离心。 检测完吸光度后，将上清液体吸回对应原 EP 管内。 放置 EP 管入离心机时，保持所有管子摆放方向一致，沉淀血块形态、大小会更加规整。设置10000 rpm，20 min离心，红细胞沉淀牢固附着在管底，即可进行拍照留存。 五、实验小 tips 可以用胶固定离心管底部，减少离心过程中管子移位。 完成 OD 检测、液体回吸原管后，采用10000 rpm，20 min高速离心，红细胞沉淀紧实，后续挪动、摆放 EP 管时沉淀不易散开。 |
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