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stantontang金虫 (小有名气)
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关于叠氮和炔的CuAAC工艺问题
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最近在做抗体药物偶联，使用的是含叠氮的抗体和带炔的小分子偶联，按文献方法尝试，偶联效率比较低。 主要尝试如下， 1. 首次使用2 eq的小分子，1 eq的Cu+5 eq的THPTA，Cu 10倍当量的Vc，pH7.2的PBS和HEPES缓冲液都试了，PBS会沉淀偶联率只有20%，HEPES能达到60% 2. 又试了pH6.5的MES体系，这次尝试了1 eq的Cu+5 eq的THPTA和5 eq的Cu+25 eq的THPTA，Cu 20倍当量的Vc，并且又加了5 mM的氨基盐酸胍，然而几乎未偶联 3. 看到文献增加氯化锌，在2的基础上，添加了15 mM的氯化锌，体系是乳白色悬浊液 请大神帮看下，哪里问题，我的理解氨基盐酸胍是防止蛋白被氧化，氯化锌是防止体系有消耗金属Cu的，氨基盐酸胍能络合氯化锌？氯化锌本身又是蛋白沉淀剂，这逻辑比较混乱 CuAAC催化，如何优化呢？有大神指导下，如何能提高到90%以上偶联效率？ |
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