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如何稳定的将一基因导入到小鼠细胞中~
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要求能够稳定表达。 原来做过微生物的转基因,现在这个是哺乳动物细胞，所以不知道从何下手~ |
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qingfengwu
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-22 18:17
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做稳转株很简单啊。 推荐用两种方法 （1）钙转或者脂转把质粒转进哺乳动物细胞系，2－3天后用G418杀没有转染上的细胞，杀上1－2个月基本上就得到了稳转株。在这个期间，你如果不想等那么长时间，杀上1周后，可以把细胞铺得很希，等个两三天等每个细胞都长出一点细胞克隆群来，就可以用枪头挑单克隆细胞株，放到96孔板里面。然后从96孔板里面挑出你所需要得稳转株来。 （2)慢病毒感染 把你的基因安装到慢病毒的载体中，包些慢病毒，即使不用浓缩慢病毒，做个稳转株都基本上不会有问题，慢病毒感染进去细胞以后，就可以迅速整合到细胞系基因组里面取了。这种方法迅速，方便，一个礼拜以后就可以拿到稳转株了。 |
2楼2009-11-22 17:56:56
3楼2009-11-23 12:40:30
qqsvery
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在做具体的质粒构建的时候要考虑真核生物与原核生物在基因结构上的区别！ 区别：原核生物的DNA的编码区是连续的,真核生物DNA的编码区是间断的,即真核生物的DNA的编码区有内含子和外显子,复制时同时复制内含子和外显子,但翻译的最终结果是成熟的mRNA只携带外显子的遗传信息,内含子的遗传信息被切除.原核生物的DNA的编码区没有内含子和外显子一说,全部是有遗传意义的片断,是完全翻译.另外，真核细胞的基因完全是由DNA构成，而有的原核基因还会由RNA构成，例如RNA病毒。下图为原核生物基因结构： 这个是真核的基因结构： [ Last edited by qqsvery on 2009-11-23 at 14:12 ] |
4楼2009-11-23 14:07:44