| 查看: 25 | 回复: 0 | |||
科研战神来了新虫 (小有名气)
|
[交流]
好不容易铺好板，气泡一冒全部返工怎么办
|
|
细胞实验移液混匀环节，处理含蛋白的培养液、缓冲液、抗体稀释液时，很容易生出气泡。气泡会划伤细胞、干扰镜下观察、改变体系体积，也会影响孵育、染色、定量检测结果，下面从预防和事后处理两个方向整理实操方法。 一、操作环节，减少气泡生成吸液、排液动作保持缓慢匀速，流速过快会裹挟空气进入液体内部，形成气泡。排液操作优先选择贴壁排液，枪头贴着容器内壁流出液体；不要在液面上方直接冲击液面。排液至末尾阶段，避免把枪头内残留空气打入液体。吹打混匀是气泡高发步骤，可以采用低液位吹打技巧。首次吸液吸至设定容量，后续反复吹打的循环里，不要将液体完全排净、也不要吸满，枪头内部始终留存一小段液体。整套吹打过程枪头全程置于液面以下，直到混匀操作结束。最后一次排液，将枪头移出液面，贴着管壁缓慢排尽剩余液体。 二、已经产生气泡，分级处理办法微量气泡：选用10 μL 小量程枪头，轻轻戳破气泡，或是直接抽吸气泡内部气体，让气泡消散。操作力度轻柔，避免扰动下层样品。中等量气泡：选用1 mL 大号枪头，在气泡上方保持一小段距离，间断向气泡表面轻吹气流，借助表面张力变化让气泡破裂。少量至中等气泡：手持离心管，轻弹或者轻磕气泡附着的管壁位置，依靠震动让气泡破裂、上浮消散。大量气泡：使用 1 mL 枪头，小心吸取上层气泡，尽量少吸取下层液体；吸取完成后，在液面上方贴壁缓慢排出，重复多次，逐步降低气泡总量。绵密细碎气泡，前面方法效果有限时，采用低速短时间离心处理，依靠离心力让气泡上浮到液面，再进行后续去除。 三、注意事项蛋白类体系黏度更高，气泡的表面张力更强，气泡生成后更难自行消散，优先做好前期预防。吹打混匀不要追求过快的混匀速度，延长混匀时间，放缓动作，是降低气泡发生率最稳妥的方式。如果是活细胞样本，消泡操作全程控制力度，剧烈震动、高速离心会造成细胞损伤。 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧
已经有3人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有7人回复
50