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re_i

新虫 (小有名气)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] 求助：基因克隆为什么一直失败？

我基因克隆反复失败，我把实验室的所有酶都用了一遍，还做了好几次新的dna模板，合成了很多次引物，试遍了退火温度，循环次数增加到40+圈，都没用。后来只剩基因序列没检查，我就问带我的高年级研究生基因序列的事，他很不高兴，感觉是觉得我做不出来实验还怪实验室，就不跟我说，只说以前别人都能克隆出来那个基因，过了一段他又说他把那个基因克隆出来了，但是克隆结果被别人扔掉了，我没能拿到他克隆出来的基因往下做，但当时我觉得他能克隆出来，我肯定也能克隆出来，但我一直克隆失败。别人都觉得克隆失败是我的操作问题，说加试剂的时候如果枪头进入液面以下或者悬空，液体表面张力就会影响加的量，然后我加试剂的时候就让枪头离液面很近又恰好不挨着液面，但是这样加很难，我加得都抓狂了，感觉还是没法完全克服液体表面张力的影响，克隆也一直失败。别人看我连最简单的基因克隆都做不成，也不让我换其他实验做，一直让我克隆这个基因。但是我被迫克隆了一年后，我突然听一个混我们实验室的本科生说，我那个基因的转录组测序结果出来了，当时我也不知道什么是转录组测序，只看到那个本科生在用我那个基因的基因序列和转录组测序测出来的基因序列进行比对，比对结果显示两个基因序列错配得密密麻麻，那个人当时就说“我就说不对吧！”周围的人都认同实验室给我的基因序列是错的、所以根本克隆不出来。这是什么意思？基因序列为什么会错，而且错这么多，我没有他们的转录组测序结果，但当时目测错了起码40%多，这种情况正常吗？之前带我的研究生是在撒谎吗？因为我也没亲眼见过他或者别人的克隆结果，既然基因序列错那么多，引物应该也错得很多吧？我记得引物只要错一点就会克隆失败。但是后来我发现，我实验室的一个已毕业的博士发过一篇关于那个基因的论文，论文里说他们克隆出了那个基因，还鉴定了那个基因的功能，这篇论文发表于我进实验室的前一年，也就是我做这个实验的前一年，那个博士应该就是在我进入实验室的前一年毕业的。有人明白这是怎么回事吗？
ps，我做的是最基本的那种基因克隆，没有巢式什么的。

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