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Western Blot实验
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Western Blot是一种常用的蛋白质检测技术，通过将经过PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体（如硝酸纤维素薄膜）上，以非共价键形式吸附蛋白质，从而保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以下是Western Blot实验的关键步骤： 1?? 抗体杂交： 封闭：使用5%脱脂奶粉或5%BSA（用TBST溶解），室温孵育1小时，或4℃过夜。 一抗孵育：将一抗稀释后，4℃过夜孵育，或37℃孵育1-X小时。 洗涤：用TBST洗膜，室温下5分钟×4次。 二抗孵育：将二抗稀释后，室温孵育1小时。 再次洗涤：用TBST洗膜，室温下5分钟×8-12次。 2?? 显色与检测： ECL显色：使用ECL显色试剂（如Thermo的SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate），在X光片上进行压片或使用扫描仪进行扫描。 实验中使用的溶液和试剂包括： TBS buffer（pH 7.5）：Tis:Cl 12.1149 g/L，ddH2O定容至1L。 TBST：在TBS中加入1 mL Tween 20，定容至1L。 封闭液：5%脱脂奶粉或5%BSA（用TBST溶解）。 一抗和二抗：根据具体实验需求进行稀释。 ECL显色试剂：如Thermo的SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate。 通过以上步骤，您可以完成一个完整的Western Blot实验，从而检测特定蛋白质的表达情况。 发自小木虫手机客户端 |
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