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当你的细胞提前退休：老化原因+预防方案
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1. 老化是什么 细胞老化是指细胞随时间推移发生的进行性衰退，这是生命发展的必然过程。 从细胞层面来看，老化涉及到细胞结构蛋白、酶蛋白和受体蛋白合成的减少，以及摄取营养和修复染色体损伤的能力下降。这表现为细胞和胞核变形，线粒体、高尔基体扭曲或呈囊泡状，胞质色素沉着，细胞体积缩小，从而导致器官重量减轻，间质增生硬化，功能代谢降低，储备功能不足。在显微镜下观察，老化的细胞内部可能会出现空泡 (可能是凋亡小体) ，也可能会出现黑点，大多沿细胞周边排布，内部中间也可能会显现一些，但相对周边为少。 肉眼显微镜下观察细胞主要镜下特征： ① 细胞内部会出现空泡 (可能是凋亡小体) ，也可能会出现黑点，大多沿细胞周边排布，内部中间也可能会显现一些，但相对周边为少。 ② 老化以后的细胞会出现形态的改变，立体感会慢慢消失，开始成扁平 状，细胞与细胞之间的间隔减小或混在一起，细胞不再是梭形，而会成为各种不规则形状。 ③ 细胞折光性变差，镜下可见细胞“变薄” ，做转染实验时，细胞死亡率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象，仍清亮。 ④ 细胞的贴壁性减弱，开始有细胞漂浮于培养液中。 ⑤ 老化的细胞，表面分泌物会增多，细胞表面的纯净度越来越低。 ⑥ 分裂的细胞数量明显地减少同时细胞的增殖速度也会大大下降。 ⑦ 细胞开始长角分化。 2. 老化的原因 ① 氧化应激：由内在或外在因素引起的氧化压力会加速细胞老化。 ② 端粒缩短：端粒是染色体末端的保护结构，其缩短会导致细胞分裂次 数有限，从而引发细胞老化。 ③ 细胞自噬功能降低：细胞自噬是细胞内部清理和修复机制的一部分， 功能降低会导致细胞老化。 ④ 营养不足：培养液中的营养成分不足也会导致细胞老化。 ⑤ 传代次数过多：在体外培养过程中，细胞传代次数过多或时间过长也 会引起细胞老化。 3. 如何预防细胞老化 ① 不要等细胞长得太满才传代。细胞太密会导致细胞状态下降，产生细 胞接触性抑制。一般密度到 80-90%左右就可以传代了。 ② 细胞不要消化过度。采用胰蛋白酶消化细胞，会造成细胞表面一定程 度的细胞损伤。一定要注意选用的胰酶品牌，使用的胰酶量，绝大多数细胞 使用 0.25 胰酶含 edta 这款消化液，t25 瓶 1ml ，培养箱消化 1min 即可拿出来 在显微镜下看细胞脱落情况。 ③ 最重要的是使用优质的血清和培养基：干细胞对培养基中的内毒素非 常敏感。除了要留意基础培养基的内毒素外，也要留意血清的内毒素。如果 血清中内毒素≥3EU/ml 时，干细胞很容易老化或死亡，导致细胞“亚健康”状 态，导致实验受到影响。很多使用者，在血清在试用前，就会通过提早审核 该批次《检测报告》，以决定是否入围进行试用。 ④ 在开始养细胞并传代时，也要特别注意冻存细胞，以保持细胞有种子 库存在，可以有效避免细胞损伤。 |
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