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血清使用避坑指南：从挑选到解冻，避开这些误区让细胞茁壮成长
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血清是一种纯天然培养基，含有细胞生长繁殖所需的多种营养成分，如 蛋白质、多肽等，多用于细胞培养、生物制品及诊断试剂的生产。 血清的主要成分是蛋白质，如：白蛋白，球蛋白，纤维粘连素 (促进细 胞附着)、α2 巨球蛋白 (抑制胰蛋白酶的作用)，激素，胰岛素 (可促进细胞 摄取葡萄糖和氨基酸，促细胞分裂)，类胰岛素生长因子 (能与细胞表达的胰 岛素受体结合，从而产生与胰岛素相同的作用)，促生长激素 (细胞增殖)， 胎球蛋白 (促细胞附着)，转铁蛋白 (能结合铁离子，减少其毒性) 。 血清的组成成分与含量常常与供血动物性别、年龄、生理条件和营养条件有关。下面我们来了解一下血清的小知识。 血清那些事，你知道吗？ 1. 如何挑选适合细胞生长的血清？ 原代或是正常细胞株建议使用不同级别血清，对生长条件要求高的 细胞和干细胞可选用特级/超级胎牛血清，或胚胎干细胞专用胎牛血清。 由于血清有批间差异，细胞种类不同，我们建议客户购买前可先申请试 用样品，通过筛选得到满意的血清批号，之后根据项目需求可进行批量囤货， 以保证该项目所需血清质量的一致性，可排除不同批号血清对于实验带来的 影响。 2.如何正确保存血清？效期？ 需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱 (未开封血清有效期为 5 年)。 若存放于 4℃ ，请勿超过 1 个月，若一次无法用完一瓶，建议将血清无菌分 装、冷冻保存。 3.如何解冻血清？ 血清解冻需采用逐步解冻法：将血清从-20℃冰箱放入 2~8℃冰箱使之部分溶解 (放置时间：不超过 24 小时)，然后移入室温，待全部溶解后再分装。 在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀 (小心勿造成气泡)，减少沉淀生成。切勿 直接将血清从-20℃转入 37℃解冻，这样因温差过大易造成蛋白析出及一些活 性因子失活。 4.胎牛血清的颜色正常应该是？ 胎牛血清因其成分较为复杂，不同批次间外观颜色会有一些差别。一般 来说，它们的颜色可能是黄色、偏红色、或类似琥珀的棕色，也可能介于这 三者之间。 5.需要对新买的血清进行过滤吗？ 血清在 C+A 环境下生产，经过 3 次 0. 1μm 过滤，出厂经过检测并且会使用三 种以上的细胞株进行培养测试及无菌检测，污染几率非常低。通常细胞污染 有非常多的可能性，根据协助使用者进行分析检测，结果表明绝大部分都是 因人为操作失误导致污染。因此买来的血清不需要再次进行过滤。 血清使用及血清析出物深入解析与说明 在细胞培养中，血清的品质在一定程度上可以影响到细胞培养的成败， 如果血清中出现析出物，不免会让人担心细胞会不会因为析出物而出现问题。 所以，关于血清使用及血清析出物，分享以下几点内容： 1. 使用注意事项： ① 在使用血清前，请仔细检查产品外观是否完整，有无破损、漏液等情况。 ② 血清应储存在- 15℃以下温度环境中，避免温度过高影响血清质量。 ③ 使用时严格按照相关实验操作规程进行，避免污染。 2. 血清中析出物质： 血清中析出物为正常现象，非污染，不影响血清使用品质，可放心使用。 析出物多为纤维蛋白、脂蛋白等牛源蛋白。 出现蛋白析出主要因素： ① 保存时间：血清刚生产后是没有沉淀的，储存时间越久，析出的沉淀 越多； ② 温度变化：温度剧烈波动，特别是低温储存后快速升温时可能导致析出。 血清沉淀物对细胞培养有什么影响？ 血清出现析出物是血清的正常特性，经过我们的试验以及细胞培养经验 表明，血清析出物不会影响细胞培养。 血清中的析出物该如何去除？ 血清出现析出物后，如需去除，可将其分装至无菌离心管，400~1000g/min 离心 5~10min ，取上清液使用即可。 3. 如何避免血清中出现析出物： ① 解冻过程需将血清上下颠倒，摇晃均匀，使温度及成分均一，减少絮状物沉淀出现； ② 请勿将血清由-20℃直接置于 37℃温度条件下解冻，温差过大易造成 蛋白析出；建议将血清从冷冻室先移至 2~8℃冰箱使之部分溶解(放置时间： 不超过 24 小时) ，再放置于室温环境完全融化； ③ 严禁将血清置于 37℃温度下孵育解冻，否则会产生沉淀； ④ 使用过程中，避免反复冻融； ⑤ 若一次无法用完 1 瓶，建议将血清按单次使用规格无菌分装并冷冻 保存； ⑥ 若非必要，请勿进行血清热灭活，否则易造成沉淀增多； ⑦ 解冻后，血清不易长时间 (6h 以上) 放置于室温环境。如若一次性未 用完，请及时置于 2~8℃冰箱保存。 |
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