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ELISA实验步骤 已有1人参与
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如何进行ELISA实验：详细步骤指南 ? 嘿，大家好！今天我们来聊聊如何进行一个经典的免疫学实验——ELISA（酶联免疫吸附试验）。这个实验在生物学和医学研究中非常常见，特别是用来检测蛋白质的浓度。今天我们就以人TNF-α（肿瘤坏死因子α）为例，详细讲解一下步骤。 准备工作 ? 首先，你需要一个试剂盒，里面包含所有需要的试剂。一般来说，试剂盒里会有一个已包被好的孔板，但如果你用的是没有包被好的孔板，那就需要自己动手包被了。具体步骤是：用ddH2O稀释5x的coating buffer，然后用这个稀释后的buffer再稀释200x的抗体。记住，要按照你需要的孔板体积来计算，比如7个实验组3个复孔，加上8个标准曲线2个复孔，总共需要37个孔。每个孔大概需要100μl，所以你需要4.2ml的抗体，算出来就是21μl。 包被孔板 ??♂? 接下来，把孔板放在4℃冰箱里孵育16-18小时。这个步骤非常关键，因为包被得好坏直接影响后续实验的结果。 洗板 包被完成后，用洗板机洗板4次，目的是把没包被上的抗体洗掉。然后加入封闭液，200μl/孔，这样可以减少非特异性结合的影响。 封闭孔板 ? 封闭液在室温下孵育1小时，期间要在平板床上摇动。然后再洗板4次。 加样 ? 每孔加入100μl的标准品或样品，然后在室温下孵育2小时，期间继续摇动。之后再次洗板4次。 加入Detection Antibody Solution 每孔加入100μl的Detection Antibody Solution，然后在室温下孵育1小时，期间摇动。再次洗板4次。 加入Avidin-HRP 每孔加入100μl的Avidin-HRP，然后在室温下孵育30分钟到1小时（具体时间根据Avidin-HRP的说明来定）。最后洗板5次，最后一次洗涤时可以在缓冲液中浸泡30秒到1分钟，这样可以减少背景。 显色 每孔加入100μl的TMB显色液，避光孵育15分钟。然后加入100μl的Stop solution。 读取吸光值 在15分钟内读取在450nm处的吸光值。这个值就是你要的结果啦！ 小贴士 整个实验过程中，记得保持操作台的清洁和无菌操作。避免交叉污染和操作失误。 每个步骤都要严格按照试剂盒的说明来操作，不要偷懒哦！ 多练习几次，你就能掌握这个技巧啦！ 希望这篇指南对你有所帮助！如果有任何问题，欢迎留言讨论！ 发自小木虫手机客户端 |
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