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探秘T细胞扩培的神奇世界
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在医学的进步中，T细胞扩培正成为一种引人注目的研究领域。这种技术不仅可以帮助我们更好地理解免疫系统的奥秘，还能够为治疗癌症、传染病和自身免疫性疾病等提供新的治疗途径。让我们一起踏上探索之旅，揭开T细胞扩培的神秘面纱，探索健康未来的可能性！ 免疫细胞的培养扩增 当我们通过各种方式获得免疫细胞后，需要在体外模拟其在体内的生长环境对其进行培养、扩增来达到我们的研究目的。而不同免疫细胞涉及到的细胞因子，激活通路不同，因此培养方法也各不相同，本文列举一些免疫细胞的培养体系仅供大家参考，在实验过程中可以根据需求和实际情况进行摸索和进一步优化，来获得我们想要的免疫细胞。 1. T细胞的活化、增殖培养与分化： T细胞的激活涉及到两个信号通路：TCR/CD3与APC表面特异的MHC-多肽复合物结合产生的特异性抗原刺激信号；APC表面多对共刺激分子和T细胞相应受体作用后产生的非特异性的共刺激信号。 最常见的用于T细胞体外活化的是Anti-CD3和Anti-CD28，在两者的协同作用下，可使T细胞充分活化。 细胞因子的调节功能 1. 激活小鼠T细胞 ① 从96孔组织培养板中的100-200µL培养基中的8×104个纯化T细胞开始。 ② 添加2µL预洗涤和重悬的Dynabeads®磁珠，使磁珠与细胞的比例为1:1。 ③ 根据具体实验要求，在37°C的加湿CO2培养箱中培养。 ④ 采集活化的T细胞并直接用于进一步分析。 以上是T细胞的活化步骤。 注:原代细胞在体外培养时间不宜过长，建议在14d以内。 2. 细胞传代 2.1 贴壁细胞 ① 用废液泵小心移去细胞培养基，加适量PBS清洗一遍细胞。 ② 小心移去PBS，加入适量（1.5~2mL/10cm培养皿）0.25%胰酶，摇动培养皿使胰酶浸润所有细胞，随后放入37℃培养箱中进行消化。 ③ 不同细胞消化难以程度不同，消化一两分钟后在镜下观察细胞，直至胞质回缩，细胞变圆，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 ④ 加入至少二倍胰酶用量的完全培养基终止消化。 ⑤ 1000rpm，离心5min。加入1-2mL培养基轻轻吹散细胞，吹打混匀后形成细胞悬液。 ⑥ 取20μL细胞悬液于显微镜下进行计数（本实验室可经台盼蓝染色后用细胞计数仪计数）。 ⑦ 根据计数结果以合适的密度转移到新的培养瓶中培养。 2.2 悬浮细胞 ① 将培养中的细胞用枪头转移至15ml或50ml离心管中； ② 1200 rpm离心3min； ③ 离心后去上清，加入1~2mL完全培养基进行重悬； ④ 轻轻吹打混匀后，取20μL细胞悬液于显微镜下进行计数（本实验室可经台盼蓝染色后用细胞计数仪计数）。 ⑤ 根据计数结果以合适的密度转移到新的培养瓶中培养。 3. 细胞冻存 ① 细胞按上述步骤消化离心后去上清，加入细胞冻存液重悬细胞（1个10cm培养皿的细胞冻存1支，1mL/支），将细胞轻轻吹打混匀； ② 在冻存管管壁做好标记（细胞名称、培养基、代数、冻存时间），将细胞悬液装入冻存管中，每管1mL； ③ 冻存方式有2种： 将细胞冻存管直接装入冻存盒，拧紧冻存盒盖子，放入-80℃冰箱中过夜，第二天取出冻存管，移入液氮罐中冻存，并在细胞冻存记录表对应位置做好细胞冻存记录； 将细胞冻存管依次放入4℃冰箱10min、-20℃冰箱30min、-80℃冰箱过夜、第二天放入液氮罐中冻存，并在细胞冻存记录表对应位置做好细胞冻存记录。 4. 细胞复苏 ① 液氮罐中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，摇动令其尽快融化（尽量1-2min内融化）； ② 确认融化后，从37℃水浴中取出冻存管，用酒精喷洒管壁和管盖后放入超净台； ③ 在超净台中打开冻存管盖子，用1mL枪头将管内的细胞悬液加到预先装有5mL完全培养基的15mL离心管中，轻轻吹打混匀； ④ 吸出1mL培养基到冻存管中，轻轻吹打再转入15mL离心管中避免冻存管中残留细胞。 ⑤ 将细胞悬液进行离心，1000rpm，5min，去上清后加入1mL完全培养基重悬，吹打混匀后计数，最后根据细胞数量选择合适面积的培养皿进行铺板； ⑥ 将细胞放入37℃，5%CO2培养箱中静置培养。 |
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