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义翘神州

新虫 (小有名气)

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[交流] 新品首发 | 义翘神州重组Diacetinase：脂肪酶检测试剂开发新选择

新品首发 | 义翘神州重组diacetinase：脂肪酶检测试剂开发新选择
急性胰腺炎（ap）是常见的消化系统急症，其检测主要依靠血清胰酶，如脂肪酶、淀粉酶。研究发现，脂肪酶特异性更高、升高持续时间更长，具有更广的诊断时间窗口和灵敏度，已逐渐取代淀粉酶，成为ap的首选生物标志物。脂肪酶还从单一的疾病诊断逐步扩展到病情评估、并发症预测及个性化治疗指导等方面，与其他指标、影像学检查联合应用，有助于提高胰腺疾病诊疗的效率和准确性。
脂肪酶可通过酶法或免疫学技术来测量。diacetinase（二乙酸甘油酯酶）是检测过程中常用的酶。通过谷歌、百度、ai等工具搜索，市面上该酶主要为枯草芽孢杆菌的天然提取物，没有重组酶产品。
近日，义翘神州（sino biological）率先推出大肠杆菌表达的重组diacetinase（货号：d401-31h），具有批间一致性稳定、未携带杂酶活性、可连续供应等优势。经验证，重组酶的催化活性与天然来源的酶相当，可作为脂肪酶诊断试剂开发的替代方案。

01 脂肪酶检测为何比普通酶更复杂？
脂肪酶（lipase，lps，又称甘油三酯酶）属于界面酶，将甘油三酯水解为脂肪酸和甘油，对长链脂肪酸甘油具有特异性。人体脂肪酶主要合成部位是胰腺腺泡，是血清脂肪酶的主要来源。其在胰腺中以酶原形式存在，经腺腔转运至小肠，在小肠中被激活成有活性的脂肪酶，参与脂类代谢。正常血液中仅有少量脂肪酶。血液中的脂肪酶经肾小球过滤被清除，所以在尿液中检测不到其活性。
脂肪酶催化反应通常发生在油水两相界面。检测结果除了与酶浓度相关，还会受到底物乳化状态、颗粒大小、表面活性剂、胆汁酸、温度、ph等多种因素影响。同时，血清中还可能存在脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶和多种脂酶。
脂肪酶有多种检测方法。滴定法以检测脂肪酸释放引起的碱消耗为原理，适用于酶学研究和方法比较，但操作复杂，难实现高通量和自动化。比浊法监测乳化底物水解后的浊度变化，受乳化稳定性、颗粒分布和样本本底影响较大。免疫测定需要结合胰腺脂肪酶特异性抗体。
多酶偶联法则提供了另一种技术路径，不直接测量脂肪酸或底物浊度，而是将脂肪酶作用的中间产物转化为甘油，再通过成熟的甘油检测体系生成光学信号。二乙酸甘油酯酶（diacetinase）是反应链条中关键的酶。
02 diacetinase如何实现信号可测？
在脂肪酶检测方法的专利中（专利号：ep0101046b1）对diacetinase作用机制进行了详细描述。脂肪酶底物为含有长链酰基和短链乙酰基的混合链甘油三酯，其反应过程可以概括为：
混合链甘油三酯→二乙酰甘油→甘油→甘油 3 磷酸→过氧化氢→有色产物
样品中的脂肪酶水解长链酰基，生成可溶的二乙酰甘油。diacetinase快速将其水解，释放甘油。甘油在atp和甘油激酶作用下生成甘油 3 磷酸，再经甘油磷酸氧化酶作用产生过氧化氢，通过过氧化物酶体系进行检测。
在多酶偶联检测体系中，diacetinase是脂肪酶活性检测的关键“桥接酶”，将脂肪酶作用后形成的水溶性物质转化为甘油。同时，将难以直接量化的界面水解反应转化为成熟的水相显色反应，便于通过吸光度或反射光度进行自动化检测。因此，diacetinase的活性、杂酶含量、稳定性等，会影响检测的线性范围、响应速度和信号准确性。
03 diacetinase从天然提取到重组表达
传统diacetinase主要从枯草芽孢杆菌培养物中提取。专利显示（专利号：us4444886），其生产过程需要经过菌株培养、细胞破碎、离心及有机溶剂分级沉淀等步骤。diacetinase属于胞内酶，提取过程还需要关注杂酶、菌株自身蛋白等污染。天然提取物的质量受到培养条件、收获时间、纯化效率等因素影响，限制了diacetinase的适用场景。
重组表达有助于建立明确的生产质控标准，为批间一致性和规模化供应奠定基础。重组表达宿主来源明确，通过标准化纯化和质量控制工艺降低非目的蛋白的影响，实现长期稳定供应，助力脂肪酶检测试剂开发。
义翘神州 d401 31h采用原核大肠杆菌系统表达。经检测纯度达到99%，活性达到0.4 u/mg liquid，与天然酶蛋白显示出相近的催化活性，且批间一致性更稳定。研究团队还对杂酶：胆固醇酯酶（ce）活性进行检测，结果显示其活性不足d401 31h的1%，有效降低非目标酶活的干扰。
04 卓越品质，源于科学验证
1 与天然酶活性相当