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liyong1981

金虫 (正式写手)


[交流] 质粒电泳~

质粒提取了24个不同的类型。没有酶切,直接跑电泳,结果前四个是一条带,大小符合,后面的都有3到三条带啊,而且大小差别很大,比如说一个电泳槽里有2K左右的带还有5K左右的带,用得是宝生物的试剂盒提的,救命啊!!!
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liyong1981

金虫 (正式写手)


大虾们,怎么回事啊
2楼2009-11-20 18:29:06
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 11-20 19:45
很正常,这与你提取的质粒的质量有关,提的好的质粒一般都是超螺旋,比标准的分子量要小,有时候也可能是松散的闭环的双链,还有被破坏的,打断的质粒,他们在电泳的时候速度是不一样的,所以就会出现一个泳道有不同的条带的现象。
3楼2009-11-20 19:18:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-21 17:06
如果提质粒时是24个同时操作的话,估计碱裂解时间过长了。我最多只敢一次提10份。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-11-21 15:50:04
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-21 17:06
大虾们,我今天做客单酶切,结果

我23130的maker左右每个样品都有很浅的一条暗色,酶切的线性片段大小还是比较符合预期的,估计裂解时间长了的,基因组污染了,有解救办法没啊?怎么去掉啊,要不还要重新提的
5楼2009-11-21 15:59:41
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liyong1981

金虫 (正式写手)


我保存的有上次质粒转进去的菌液,加了甘油的,大家觉得我按什么比例再取点加到抗性LB中去摇合适呢?谢谢了~一般摇多长时间~
6楼2009-11-21 16:26:46
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xuyy1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
200微升加到50毫升含相应抗生素的LB液体中 大约37度摇床培养 8到12小时 就能出结果了 也可以适当延长时间到18小时左右  个人经验
每次心情跌到谷底,就对自己说:休息一下再重新开始吧
7楼2009-11-21 16:44:36
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liyong1981

金虫 (正式写手)


8楼2009-11-21 16:48:57
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