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科研战神来了新虫 (小有名气)
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病理技术知识！HE染色常见问题与优化对策（上）
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1、切片出现水珠 原因：切片经过梯度乙醇处理后脱水不完全，残留水分无法被彻底除去，进入二甲苯透明、中性树胶封固步骤后，水分被封在盖玻片下方，形成肉眼可见的水珠，遮挡组织视野。 优化对策：取下盖玻片，用二甲苯充分溶解中性树胶封固剂；随后将切片放入无水乙醇重新充分脱水，再经过二甲苯透明，最后再次封固。同时要做好前置质控，脱水、透明所用试剂长期使用后含水量会上升，必须定期更换，从源头避免脱水失效。 2、细胞核呈现红色、棕褐色 原因：来自苏木精染液与返蓝流程的缺陷。一方面苏木精染色液放置太久发生过度氧化，染色活性下降；另一方面切片完成苏木精染色后，返蓝处理时间不足，无法完成显色转换。 优化对策：应提前核验苏木精染液的着色能力，氧化严重的染液及时更换。染色结束后预留充足返蓝时间，可采用流水、温水，或是稀氨水、0.2%碳酸氢钠弱碱性溶液完成返蓝，保障细胞核正常蓝染。 3、切片脱蜡后出现大片白色斑点 原因：大多是脱蜡工序不到位造成。第一种情况是烤片温度偏低，石蜡薄膜没有充分融化；第二种是切片浸泡二甲苯时间不足，或是二甲苯反复使用浓度下降，石蜡残留于组织表面形成白斑。 优化对策：若是烤片不足导致，需要去除原有封固胶，重新二甲苯脱蜡；若是二甲苯失效、浸泡时间不足，则更换新鲜二甲苯，延长脱蜡时长，再依次经过乙醇、盐酸褪色后重新整套HE染色。 4、细胞核苍白暗淡、苏木精染色整体偏淡 原因：苏木精染色时长太短、染液氧化失效、酸性分化时间过长；组织固定不及时；骨组织样本则大多因为脱钙过度。 优化对策：处理时优先进行重染色。如果样本经过酸性固定液处理，细胞核着色能力受损，需要适当延长苏木精染色时间，也可以更换Weigert铁苏木精染液。针对Zenker液、Bouin液固定的组织，可做前置中和处理，再开展染色，改善细胞核着色效果。 5、细胞核过染，苏木精染料弥散进入细胞质 原因：一般是苏木精染色时间过长、切片厚度偏大、分化时间不足、返蓝不充分。 优化对策：先排查切片厚度，若切片过厚则需要重新切片；切片厚度达标时，可对切片进行脱色漂白，重新染色，缩短苏木精浸染时长，适当拉长分化时间，把控整套染色节奏。 6、伊红着色偏淡，细胞质红色很浅 原因：主要包含伊红染液pH大于5，蓝化残留的弱碱性溶液中和染料，切片太薄，或是伊红染色后在低浓度乙醇脱水太久，颜色被洗脱。 优化对策：需要将伊红染液pH调节至4.6‑5.0；彻底洗净切片上残留的碱性蓝化液；把控切片厚度，缩短低浓度乙醇浸泡时间，防止伊红被过度洗脱。 7、细胞质过染、分色不足 原因：伊红染液浓度过高、染色时间过长，或是乙醇脱水分化时间不够。 优化对策：适度稀释伊红染液，缩短染色时长，规范乙醇脱水步骤的浸泡时间，同时复核切片厚度，保证细胞质染色深浅适中，与蓝紫色细胞核形成鲜明对比。 |
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