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科研战神来了新虫 (小有名气)
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病理技术知识！一文掌握病理VG染色实验
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一、VG染色介绍 VG（Van‑Gieson）染色是病理实验中用于区分弹性纤维与胶原纤维的经典染色技术，广泛应用于纤维化、血管病变、组织修复等相关科研工作，依靠不同分子量染料在组织中的渗透差异，实现多种纤维组织的色彩区分，稳定规范的操作是获得理想切片结果的重要保障。 胶原纤维是结缔组织内分布最广、含量最高的纤维类型，大量存在于皮肤、肌腱、巩膜等组织当中，不同亚型的胶原纤维分布各有区别，Ⅰ型多见于骨骼与肌腱，Ⅱ型主要存在于软骨，Ⅲ型常见于血管与胚胎组织，Ⅳ型集中在组织基膜。 二、染色原理 VG染色的核心原理依托染料分子分子量差异，小分子染料更容易穿透致密组织，大分子染料只能进入结构疏松的组织，染色完成后胶原纤维呈现鲜亮红色，肌纤维显示黄色，弹性纤维可显示紫黑色，依靠色彩差异，科研人员可以清晰分辨各类纤维成分。 三、所需实验试剂 实验试剂主要包含苏木素、三氯化铁、酸性品红、苦味酸、无水乙醇、二甲苯以及中性树胶，试剂品质会直接影响最终切片染色效果，实验前应当做好试剂检查。 四、染色步骤 1. 将石蜡切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡10分钟，完成脱蜡；随后依次经过无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精，每一步浸泡5分钟，最后用蒸馏水浸洗5分钟，完成切片水化。 2. 水化结束后，使用Weigert铁苏木素染液对切片染色5‑10分钟，染色完成后用自来水冲洗切片数分钟。 3. 使用1%盐酸酒精进行分化，分化时长需要依据切片染色深浅灵活调整，一般为数秒，分化结束再次流水冲洗数分钟。 4. 取用新配制的Van‑Gieson染液浸染切片1‑2分钟，将染液倾去，不可水洗，直接使用95%酒精进行数秒快速分化，这一步直接决定实验成败。 5. 分化完毕迅速开展脱水透明，经无水乙醇脱水、二甲苯透明，放置通风橱中风干，使用中性树胶完成封片，即可置于显微镜下镜检观察。 四、染色结果评判 合格的VG染色切片，组织形态保存完整，胶原纤维、胞浆、细胞核呈现区分明显的多种颜色，色彩对比强烈，各类纤维定位清晰，便于观察统计。而失败样本会出现组织缺损、颜色晦暗，无法开展后续镜下分析。想要规避实验失败，需要把握多项关键注意要点。 五、实验注意事项 1. 染色顺序不能颠倒，必须先苏木素核染色，再进行VG染色，VG染液呈酸性，颠倒顺序会破坏细胞核染色效果。 2. VG染色结束严禁水洗，水洗会直接造成红色信号严重褪色，95%酒精快速分化是实验成败的关键。 3. VG染色时间较短，需要结合预实验确定时间，镜下把控染色终点。 4. 脱水透明操作动作要迅速，酸性品红溶于水，切片在酒精中放置太久同样会造成红色褪去。 5. VG染液要避光低温储存，试剂存在有效期，一旦染色效果变差要及时更换新染液。 VG染色操作细节繁多，每一步试剂浸泡时间、分化程度都会左右切片质量，严格遵循标准化流程，把控好分化、脱水等关键环节，才能够得到色彩分明、形态完好的组织切片，为组织纤维化相关研究提供可靠的实验依据。  |
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