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实验动物知识！一文讲透小鼠眼眶采血操作要点、采血量控制与实操误区
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眼眶采血是小鼠动物实验中十分经典的采血方式，凭借采血速度快、获取血量充足、操作熟练后成功率高等优势，被广泛应用于药理、毒理、代谢相关的科研试验当中。但这项操作对手法规范性要求较高，一旦操作不当，不仅容易造成小鼠眼部永久性损伤，还会污染血液样本，降低实验数据的可靠性，因此需要建立一套标准化的操作流程，规避实操中的各类问题。 一、小鼠眼眶采血的优缺点 相比于尾静脉采血等方式，眼眶采血拥有独特的适用优势，单次可采集0.2‑0.3mL血液，出流速度快，创口较小，动物恢复速度相对可观。但该方法也存在不可忽视的短板，采血过程中样本有可能混入少量组织液，因此并不适合对血液纯度有着极高标准的实验项目；多次反复采血还会对小鼠眼部造成不可逆伤害，该实验操作必须经过动物伦理委员会IACUC审批之后才可以开展。 二、小鼠眼眶采血步骤 完整的小鼠眼眶采血操作一共分为五步。第一步为麻醉处理，需要对小鼠进行充分麻醉，判断标准为轻捏小鼠脚趾没有回缩反应，保证全程处于无痛状态，保障动物福利。 第二步是小鼠保定，操作人员用手从背部握住小鼠颈部，轻轻施压让眼眶静脉丛充血，保持小鼠身体呈一条直线，切记不能用力压迫脖颈，阻碍小鼠呼吸，很多新手采血失败，根源都是保定手法把控不到位。 第三步进行穿刺，将毛细管和小鼠面部保持30‑45°夹角，从眼内眦顺着眼眶壁向着眼底旋转刺入2‑3毫米，感受到阻力时立刻停手。如果没有血液流出，可以轻微旋转毛细管或是小幅退出0.1‑0.5毫米再次尝试，严禁暴力、反复穿刺眼眶。 第四步收集血液，依靠重力让血液自然流入采血管，采集到实验所需血量之后，缓慢拔出毛细管。 第五步完成止血，使用无菌棉球轻压创口止血，持续观察1‑2分钟，确认不再出血后，再将小鼠放回饲养笼内。 三、采血量控制 小鼠全身循环血量大约在1.5‑2.5mL区间，单次采血总量不能超过循环血量的10%，大致为0.2mL，失血量一旦超过15%，小鼠极易发生休克死亡。如果实验需要多次重复采血，每周采血量不可超过循环血量的7.5%，每两周采血总量上限为10%。采血结束后，可以给小鼠补充温热的等渗液体，帮助机体快速恢复状态。 四、眼眶采血常见误区 1. 很多人认为保定力度越大越好，过度挤压脖颈很容易造成小鼠窒息，合适的力度以静脉充血、呼吸平稳为准。 2. 穿刺不出血就反复扎刺，会严重破坏眼部组织，微调位置依旧采血失败就要及时停止。 3 采集后的血液长时间留在毛细管中放置处理，血液会快速凝固，采血后要尽快转移至抗凝管。 4. 止血之后不观察状态直接放回鼠笼，很容易出现术后持续出血的意外情况。 总而言之，规范的眼眶采血操作可以总结为六大要点：麻醉到位、保定适度、角度准确、深度控制、血量合规、止血观察。严格遵守操作规范，既能保障实验样本质量，也能落实动物实验伦理要求，减少动物痛苦，保障动物后续存活状态，为后续一系列动物实验打下可靠基础。 |
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