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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 长片段PCR

最近要扩一段大约3kb的片段,用taq酶扩了两次都没用,师兄建议换pfu Taq酶试试,但也有人说用 LA-Taq酶扩长片段比较好,我也彷徨了,请问各位高手,到底是用pfu好还是用LA-Taq好呢!
谢谢啊!!
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annwt

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-19 08:35
当然是LA酶,并且宝生物的LA的保真性是比较高的。
2楼2009-11-18 21:34:00
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09021122

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 11-19 08:35
虽然说LA taq是高保真的酶 但是不能凭这点就说用这种酶就能扩出你所要的目的片段
而且用pfu Taq也不一定扩不出来片段,只是不同的反应所需的酶不同而已  
建议还是两种酶都小试一下,看看效果后在大批量的扩!
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
3楼2009-11-18 21:45:42
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hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-19 08:36
xiaoyu1014126(金币+1,VIP+0): 11-19 12:49
LA一般用来扩长片段,不过并不是其他酶不能用,针对实验设计合适的体系还有程序也是很关键的。如果不行,可以选择专门扩增长片段的试剂盒。
4楼2009-11-18 22:12:56
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fykxy_206

木虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0): 11-19 08:36
3kb的片段如果用一般的Taq酶也可以扩出来。扩长链 我觉得宝生物的LA Taq酶还行。就是贵点。
5楼2009-11-19 08:19:13
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heismeng

金虫 (小有名气)


xiaoyu1014126(金币+1,VIP+0):多谢啊,你的是经验之谈啊 11-19 12:49
我用LA 都没扩出来 我的也是3kb 最后分段扩的 关键还是引物
然后3kb很容易变异 分段好些
PS 用我的很烂的引物的时候LA比PFU好用 哈哈
6楼2009-11-19 10:40:17
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