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科研战神来了新虫 (小有名气)
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[交流]
解决细胞离心后重分散结团难题，仅需增设这一步!
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一、实验准备与材料超净工作台（已紫外照射30 min，通风5 min）离心后的细胞沉淀（含离心管）无菌移液管或微量移液器（适配无菌枪头）预热至37℃的完全培养基废液缸、75%酒精棉球 二、离心步骤回顾（补充建议）离心参数：一般建议300×g，室温或4℃，离心5 min（根据细胞类型调整）。离心结束后：轻轻取出离心管，避免震荡，目视检查细胞沉淀是否紧实。 三、上清去除（关键无菌操作）缓慢倾倒：在超净工作台中，打开离心管盖，沿废液缸边缘缓慢倒出上清液，避免细胞随液体流失。 吸净残留（补充步骤）：用微量移液器（200 μL或1 mL枪头）沿管壁吸去剩余上清，注意枪头不要接触细胞沉淀表面。若使用真空泵吸液，需调整吸头位置，避免直接吸走细胞。 四、细胞团分散前处理持管姿势：用拇指与食指捏住离心管管盖上方（不是管身），使离心管呈45°倾斜。轻敲分散：将倾斜的离心管管口朝下约15°，在超净工作台干净的台面边缘轻轻敲击3~5次。目的：利用微振动使紧实的细胞团松散为小团块，但不过度损伤细胞。判断标准：肉眼可见沉淀表面出现细微裂纹或轻微滑动，无明显液体溅出。 五、重悬吹打（规范手法）加入培养基：根据实验所需细胞密度，加入适量预热培养基（通常1~5 mL）。建议不要直接吹打前加入全部体积，可先加1 mL进行初步重悬，待细胞完全分散后再补足。吹打手法：使用血清移液管或微量移液器，将液体沿管壁缓慢加入，避免直接冲击细胞团。将枪头置于接近沉淀但不接触管底的位置，轻柔吸打3~5次，每次吸液量不超过总体积的1/2。观察液体变浑浊、无可见颗粒，则分散完成。 补足体积：若为后续接种或计数，用培养基调整至所需终体积。 六、操作优势更易吹散均匀：轻敲预处理减少了细胞间相互粘连，避免因直接吹打导致的大团块残留。减少碎片产生：避免强行大力吹打对细胞膜造成的机械损伤，提高活细胞比例。提高实验重复性：标准化操作后，细胞计数和铺板一致性更好。 |
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